Qualitative test for determination of the K antigen on human red

0843
MONOKLONAL Anti-Kell
Tüp, Slayt, Diamed-ID ve Mikroplak Testler
Kan gruplama
İnsan kırmızı kan hücrelerinde K antijenin belirlenmesi için kalitatif
test
IVD
2-8ºC’de sakla
METHOD PRENSİBİ
Reaktifler, K antijeni taşıyan test kırmızı hücrelerinin direkt aglütinasyonuna (pıhtılaşma)
neden olacaktır. Aglütinasyon olmaması genellikle K antijeninin yokluğunu gösterir
(Sınırlamalara bkz).
KLİNİK ÖNEM
1946 yılında K antijeni rapor edildi. Antijen doğumda tamamen gelişir ve güçlü immünojenik
olabilir. Anti-K, hemolitik Transfüzyon Reaksiyonları ve yeni doğanların hemolitik hastalıkları
içermiştir.
Anti-K
Anti-k
Fenotip
Kafkasyalılar %
Afro-Americans %
K+k+
0
0.2
Nadir
K+k+
+
+
8.8
2.0
0
+
K-k+
91.0
98.0
Ko
0
0
Fazlasıyla nadir
REAKTİFLER
Spinreact monoklonal Anti-K kan gruplama reaktifleri sığır albumin (%6 g) , makromoleküler
etkileşimciler, sodyum klorür (%0.9 g) içeren fosfat bir tamponda seyreltilmiş klon MS-56,
monoklonal IgM antikoru içeren düşük protein reaktifidir. Her reaktif daha fazla dilüsyon veya
eklemeye gerek olmadan aşağıda belirtilen tüm öneri teknikleriyle optimum dilüsyonda
verilmiştir. Lot referans numarası ve son kullanım tarihi için Şişe Etiketine bakın
6.İnkübasyon boyunca 3 ve 4’üncü adımları tekrar edin.
Slayt Yöntemi
B.
1. Serum, plazma veya PBS de %35-45 süspansiyon test kırmızı hücreleri
hazırlayın.
2. Etiketli bir testi slayt üzerine 1 hacim Anti- K reaktifi ve 1 hacim test kırmızı hücre
süspansiyonu yerleştirin.
3. Temiz bir aplikatör çubuğu kullanın ve yaklaşık 20 x 40 mm lik bir alan üzerinde reaktif ve
hücreleri karıştırın.
4. Oda sıcaklığında slaytı hafiçe eğerek arkaya ve yana doğru 30 saniye kadar çalkalayın. Bu
işlemi 2 dakika süreci içinde arada bir tekrarlayın .
5.Diffüz bir ışık üzerinde 2 dakika sonra makroskopik olarak okuyun ve fibrin ipliklerini
aglütinasyon olarak değerlendirip hata yapmayın.
6.Zayıf gerçekleşen reaksiyonlar tüp tekniği ile tekrarlanmalıdır.
C. DiaMed-ID Mikro Tipleme Tekniği
1.Bir ID-Dilüent ile % 0.8 süspansiyon yıkanmış test kırmzı hücreleri hazırlayın.
2.Gerektiği kadar mikrotüpleri alüminyum folyodan çıkarın.
3.Uygun mikrotüp içine 50μl test kırmızı hücre süspansiyonu ve 25μl Anti-K reaktif yerleştirin.
4.ID Kartlarını 90 rcf de 10 dakika boyunca ya da uygun alternatif bir zaman ve güçle
sentrifüjleyin.
5. Aglütinasyon için makroskopik olarak okuyun.
ÖNLEMLER
1. Reaktifler sadece in vitro diagnostik kullanım için tasarlanmıştır.
2. Eğer bir reaktif şişesinde kırık veya sızıntı varsa, hemen içeriğini atın.
3. Son kullanım tarihi geçmiş reaktifleri kullanmayın (Şişe etiketlerine bakın).
4. Eğer çökelti mevcutsa, reaktifleri kullanmayın.
5. Reaktiflerle çalışılırken tek kullanımlık eldiven ve laboratuar önlüğü gibi koruyucu giysileri
giyinmelidir.
6. Reaktifler bir 0,2 mikron kapsül ile biyo-yükünü azaltmak için filtre edilmiştir. Bir şişe bir
kez açıldığında içeriği eğer belirgin bozulma ve bulanıklık göstermediği sürece son kullanım
tarihine kadar kalabilir.
7. Reaktifler % < 0.1sodyum azid içerir. Eğer patlayıcı metal azit formu ile bakır ve kurşun
borular reaksiyona girerse veya yutulursa, sodyum azit toksik olabilir. Çok miktarda su ile
yıkayarak uzaklaştırın.
8. Malzemeler ürünleri üretmek için kullanılan kaynakta test edildi ve kabul edilmiş
mikrobiyolojik testleri kullanan HBsAg ve HIV 1+2 ve HCV antikorları için negatif olarak
bulundu.
9. Bilinen hiçbir test insan ve hayvan kaynaklı ürünlerin enfeksiyon etkeni taşımadığını
garanti edemez. Kullanım sırasında ve her şişenin ve içeriklerinin imhasında dikkatli
olunmalıdır.
10. Dökülen reaktiflerin ve dekontaminasyonunun atılması ile ilgili bilgi için mevcut olan
Malzeme Güvenlik Veri Sayfalar’ına bakın.
NOTLAR
1. Bir pozitif kontrol (ideal olarak heterozigot) ve negatif kontrol testlerin her bir lotuyla paralel
test edilmesi önerilir. Eğer kontrol beklenen sonuçlar göstermiyorsa, testler geçersiz olarak
kabul edilmelidir.
2. Hastanın eritrosit tiplendirmesini yaparken reaktifin negatif kontrol içermesi önemlidir. Çünkü
IgG kaplı hücrelerle makromoleküler etkileşimciler yanlış pozitif reaksiyonlara neden olur.
3.Zayıf K antijenleri jel kartı, mikrotitre plaka ve slayt tekniği ile zayıfça tespit edilebilir. Zayıf K
antijenleri tüp test tekniği kullanılarak test edilir.
4.Önerilen tekniklerde şişe damlalık kullanıldığında bir hacim yaklaşık 40μl olarak alınmalıdır.
5.Reaktiflerin kullanımı ve sonuçların yorumlanması reaktifler kullanımdaysa o ülkenin
şartlarına göre eğitimli ve kalifiye personel tarafından yapılmalıdır.
6.Kullanıcı diğer teknikleri kullanmak için reaktiflerin uygunluğunu belirlemelidir.
SAKLAMA
Dondurmayın. Reaktif şişeleri 2 -8ºC ‘de saklanmalıdır. Bu aralığın dışındaki sıcaklıklarda uzun
süreli saklanmada reaktifin reaktivitesinin kaybına neden olabilir.
GEREKLİ MATERYALLER
Cam test tüpler (10 x 75 mm or 12 x 75 mm).
Test tüp santrifüjü.
Volumetrik pipetler.
Cam mikroskop slaytları
Aplikatör çubukları.
Fosfat Tampon tuzu (PBS): NaCl 0.9%, pH 7.0 ± 0.2 at 22ºC ± 1ºC.
Pozitif (ideal olarak Kk) ve negatif (kk) kontrol kırmızı hücreler.
DiaMed ID-Kardlar (Nötr).
DiaMed ID-Sentrifüj.
DiaMed ID-Diluent: e.g. ID-CellStab.
Plaka çalkalayıcısı.
Otomataik plaka okuyucu.
Onaylı "U" kuyu mikroplakaları
Mikroplaka Sentrifüjü.
NUMUNE
Antikoagülanlı veya antikoagülansız olarak elde edilen kan örnekleri antijen tiplendirmesi için
kullanılabilir. Eğer test gecikirse örnekler 2-8 ° C'de saklanır. EDTA ve sitrat numuneleri 48
saat içinde tiplendirilmelidir. ACD, CPD veya CPDA-1 içinde toplanan numuneler çekildiği
tarihten 35 güne kadar test edilebilir. Tüm kan numuneleri test edilmeden en az iki kez PBS ile
yıkanmalıdır.
PROSEDÜR
A. Tüp Yöntemi
1. PBS içinde % 2-3 süspansiyon yıkanmış test kırmızı hücreleri hazırlayın.
2. Etiketli bir test tüp içine 1 hacim Anti- K reaktifi ve 1 hacim test kırmız hücre süspansiyonunu
yerleştirin.
3. İyice karıştırın ve bütün tüpleri 1000 rcf de 20 dakika boyunca veya uygun bir alternatif
zaman ve devirde santrifüjleyin.
4. Kırmızı hücreleri hafifçe tekrar süspanse edin ve aglütinasyonu makroskopik
olarak okuyun
5. Negatif veya şüpheli bir sonuç gösteren tüpler oda sıcaklığında 15 dakika inkübe
edilmelidir.
GSIS11
Ed.2009
D. Mikroplaka Teknik, “U” kuyularında kullanılan
1. PBS içinde % 2-3süspansiyon yıkanmış test kırmızı hücreleri hazırlayın.
2. Uygun kuyular içine 1 hacim Anti-K reaktif ve 1 hacim test kırmızı hücre süspansiyonu
koyun.
3. Tercihen mikroplaka çalkalayıcı kullanarak uygun şekilde çalkalayın, kuyudan kuyuya
bulaşma olmamasına dikkat edin .
4. 15 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin (zaman kullanıcıya bağlı).
5. 140 rcf de 1 dakika boyunca veya uygun alternatif bir zaman ve güçle mikroplakları
sentrifüjleyin.
6. Mikroplaka çalkalayıcısında çalkalanmayı kontrol ederek hücre çökeltisini dikkatlice tekrar
süspansiyon hale getirin.
7. Makroskobik olarak veya doğrulanmış otomatik bir okuyucu ile okuyun.
8.Zayıf reaksiyonlar tüp tekniği ile tekrarlanmalıdır.
TEST SONUÇLARININ YORUMLANMASI
1. Pozitif: Kabul edilebilir test koşullarında test kırmızı hücrelerinin aglütünasyon ile pozitif
sonuç vermesi test kırmızı hücrelerinde yeterli miktarda K antijeni olduğunu gösterir.
2. Negatif: Kabul edilebilir test koşullarında test kırmızı hücrelerinin aglütünasyon ile negatif
sonuç vermesi test kırmızı hücrelerinde K antijeni olmadığını gösterir.
3. Negatif kontrol kullanarak aglütinasyon edilen hücrelerin test sonuçları hariç tutulmalıdır.
Duyarlı hücreler üzerinde reaktif içindeki makromoleküler güçlerin etkisi ile aglütinasyonun
oluşabileceği gibi.
Reaksiyon stabilitesi
1. Santrifüjlemeden sonra tüm tüpleri ve mikroplak testlerini okuyun.
2. Özgünlüğü sağlamak ve reaktifin kuruması sebebiyle negatif sonucun yanlışlıkla pozitif
değerlendirilmesi olanağından kaçınmak için slayt testler iki dakika içinde değerlendirilmelidir.
3. Belirtilerden başka sıcaklıklarda yapılan testlerin sonuçlarının yorumlanmasına dikkat
edilmelidir.
SINIRLAMALAR
1.Saklanan kan taze kandan daha zayıf reaksiyon verir.
2.Yanlış pozitif veya yanlış negatif sonuçlar sebebiyle:
Test malzemelerinin kirliği,
Saklama,
hücre
konsantrasyonu, inkübasyon
süresi
veya
sıcaklığın
uygunsuzluğu,
Uygunsuz veya aşırı santrifüjleme,
Önerilen tekniklerden sapma oluşabilir.
3. Kullanıcı belirtilenlerden başka methot uygularsa reaktifin performansından kendisi
sorumludur.
4. Önerilen tekniklerden kaynaklanan sapmalar kullanım öncesi doğrulanmış olmalıdır.
PERFORMANS ÖZELLİKLERİ
1. Reaktifler, burada belirtilen tüm prosedürler ile karakterize edilmiştir.
2. Serbest kalmadan önce, Spinreact Monoklonal Anti-K’in her bir lotu uygun reaktivite
sağlamak için antijen-pozitif kırmzı hücrelerinin bir paneline karşı önerilen teknikler ile test
edildi.
3. Monoklonal antikor kaynağının özgünlüğü antijen-negatif hücrelerinin bir panelini
kullanarak kanıtlanmıştır.
4. Reaktifin kalite kontrolü kırmızı hücreler kullanılarak yapıldı ve bu hücreler kullanımdan önce
PBS ile iki kez yıkandı.
5. Reaktifler İngiltere Kan Transfüzyon Hizmetleri Rehberinin son sayısında yer alan
önerilere uymalıdır.
BIBLIYOGRAFYA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Kholer G, Milstein C. Continuous culture of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature
1975, 256, 495-497.
Race RR, Sanger R. Blood Groups in Man 6th Edition, Oxford, Blackwell Scientific Publishers 1975,
Chapter 2.
rd
Issitt PD. Applied Blood Group Serology, 3 Edition, Montgomery Scientific, Miami, 1985, Chapter 10.
th
Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine, 8 Edition, Oxford, Blackwell Scientific Publications,
1987, Chapter 7.
Guidelines for the Blood Transfusion Service in the United Kingdom. H.M.S.O. Current Edition.
British Committee for Standards in Haematology, Blood Transfusion Task Force. Recommendations for
ev aluation, v alidation and implementation of new techniques for blood groupi ng, antibody screening and
cross matching. Transfusion Medicine, 1995, 5, 145-150.
AMBALAJ
Monoclonal Anti-Kell
Ref: 1700039
10 ml
SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com