ONE-RUN qPCR SĐSTEMĐ

ONE-RUN qPCR SĐSTEMĐ - 2X
KATALOG NUMARALARI
SAKLAMA KOŞULLARI
SNPRQ2X-S (10 TEST)
•
Tüm bileşenler – 20°C de ve karanlıkta saklanmalıdır.
SNPRTQ2X-1 (100 TEST)
•
Tüm bileşenler, ürün kutusunun üzerinde belirtilen son kullanma
tarihine kadar kullanılabilir.
SNPRTQ2X-5 (500 TEST)
•
SNPRTQ2X-10 (1000 TEST)
Sürekli eritip çözdürmek, ürünün hassasiyetinde azalmalara neden
olabilir.
GĐRĐŞ
One-run qPCR kiti, RNA ve DNA ile ilgili PCR çalışmalarına uygun olarak
RNA VE DNA ĐÇĐN TAVSĐYE EDĐLEN PCR PROGRAMLARI
RNA için;
hazırlanmıştır. RNA için Revers transkripsiyon aşamasında, RNaz H
42 °C
30 dk.
kullanılmaktadır. cDNA sentezlendikten sonra 95 C’de 10 dk bekletilerek
95 °C
10 dk.
Hotstart Taq DNA polimeraz aktive edilmektedir.
95 °C
15 sn.
Kit, DNA ile ilgili PCR çalışmalarına doğrudan cDNA sentez basamağı
60 °C
1 dk.
aktivitesini düşürmek amacı ile tasarlanmış M-MLV revers transkriptaz
o
35-45 döngü
atlanarak kullanılmalıdır.
DNA için;
95 °C
10 dk.
öncelikle
95 °C
15 sn.
komplementer DNA (cDNA) sentezine ihtiyaç duyulmaktadır. Bunun için ters
60 °C
1 dk.
SĐSTEMĐN PRENSĐBĐ
RNA
molekülü
ile
gerçekleştirilen
PCR
çalışmalarında,
35-45 döngü
transkriptaz (Revers Transcriptase) enzimi ile RNA’nın kalıbı oluşturulmakta
ve elde edilen cDNA direk PCR işleminde kullanılabilmektedir. Kalıp olarak
TEST PROSEDÜRÜ
cDNA ve DNA’nın kullanıldığı 5' nükleaz testi için işlemin devamı Taq DNA
1 TEST ĐÇĐN;
polimerazın 5’exonuclease aktivitesine dayanmaktadır. Bu test için probun
•
12.5 µl qPCR Reaksiyon miks
5’ ucunda bir reporter boya ve 3’ ucunda da bir quencer boya
•
Primerler (Forward ve revers primerin her birinden 10 pmol) (*)
bulunmaktadır. Quencer boya reporter boyanın ışımasını baskılamakta aynı
•
Prob 2,5 pmol (*)
zamanda da probun primer gibi davranarak uzamasına engel olmaktadır.
•
RT/Hot Start Taq miks 0,25 µl
PCR esnasında enzim aktivitesi ile birlikte reporter ve quencer arasında
•
Toplam RNA 1 – 5 µl DNA (1 – 100 ng) (*)
bulunan prob parçalanarak ayrılır ve baskılanmanın ortadan kalkmasıyla
•
Toplam Hacim 25 µl olacak şekilde PCR Grade su ilave edilir.
ışıma meydana gelir. Bu işlem sadece hedef bölge üzerinde hibridize olmuş
•
Hafifçe pipetlenerek karıştırılır.
problarda gerçekleşir. Amplifikasyon miktarı arttıkça,
•
Tavsiye edilen PCR programı ile çalıştırılır.
reporter boyanın
açığa çıkmasıyla birlikte ışıma doğrusal olarak artmakta ve bu artış cihaz
(*) Kit içeriğine dahil değildir. Konsantrasyonlar kullanıcıya ya da çalışmaya göre
tarafından eş zamanlı olarak tespit edilmektedir.
değişebilir.
UYARILAR
ÜRÜN ÖZELLĐKLERĐ
Kit içerisinde bulunan Reverse Transcripase (M-MLV) 42-50°C’de, azaltılmış
RNaz H aktivitesi ve 220 dakika yarılanma ömrü ile aktivite göstermektedir.
HotStart Taq DNA Polimeraz enzimi, ısıya dayanıklılığı ve spesifikliği
sağlayan
Anti-Taq
monoklonal
antibodiler
ve
enzim
bileşiminden
oluşmaktadır. qPCR Reaction Miks her birinden 0.2 mM olmak üzere dNTP
SĐSTEM ĐÇERĐĞĐ
(*)Optimizasyon esnasında ihtiyaç duyulabilir.
Saklama koşullarına uygun olarak saklanmalıdır.
•
Oda sıcaklığında unutulmuş PCR master miksleri kullanılmamalıdır.
•
PCR master miksi oda sıcaklığında tamamen eritilip, baş aşağı edilerek
hafifçe karıştırıldıktan sonra tüplere bölünmelidir.
•
Master miksler tüplere bölündükten sonra Hot Start Taq DNA Polimeraz
ve DNA eklenerek hemen PCR işlemine geçilmelidir.
ve 2.5 mM MgCl2 içermektedir.
Bileşen
• qPCR Reaksiyon Miks (2X)
• RT/Hotstart Taq Miks
• 25 mM MgCl2 (*)
• PCR Grade Su
•
100 Test
2 x 650 µl
30 µl
1000 µl
500 µl
•
Belirtilenden fazla Hot Start Taq DNA Polimeraz koyulmamalıdır.
•
Yukarıda belirtilen PCR programı uygulanmalıdır.
•
PCR master miksleri vücut içinde kullanıma uygun değildir. Sadece
belirtilen türlerin tespitinde vücut dışı test kiti olarak kullanılır.
•
PCR master mikslerin raf ömrü 6 aydır. Kullanmadan önce üretim
tarihine dikkat edilmelidir.
Düzenlenme Tarihi: 12.03.2012