NİGELLA SATİVANIN ETKİN MADDESİ TİMOKİNİN T98G GLİOMA

NİGELLA SATİVANIN ETKİN MADDESİ TİMOKİNİN T98G GLİOMA HÜCRE
FENOTİPİK VE GEN EKSPRESYONLARI ÜZERİNE ETKİLERİ
Begüm Aslantaş1, C.Doğan Hacıosmanoğlu1, R.Hande Kocabıyık1, Nurbanu Koçdemir1,
Hüseyin Çamlı1
Doç. Dr. Fikret Şahin2, Ar. Gör. Can Ateş3
1.Ankara Üniversitesi Tıp Fakültesi dönem 3 öğrencisi
2. Ankara Üniversitesi Tıp Fakültesi, Mikrobiyoloji AD
3. Ankara Üniversitesi Tıp Fakültesi, Biyoistatistik AD
AMAÇ:
Nigella sativanın analjezik, antitümoral ve immun-stimulan etkileri gösterilmiştir.
Projemizde, Nigella sativanın en önemli etken maddesi timokinin tek hücrenin immün cevabı
olarak adlandıran, aralarında IFI6, MX1 ve MX2 gibi ve özellikle RNA virüslerinin hücre
enfeksiyonunda koruyucu rolleri olan moleküllerin gen ekspresyonlarına etkisi araştırılmıştır.
Çalışmamızda genetik değişiklerin yanı sıra timokin, T98G hücre kültürüne, farklı dozlarda
uygulanarak hücre proliferasyonu üzerine olan etkisi araştırılmıştır.
GEREÇ-YÖNTEM:
Thymoquinone solüsyonu hazırlanması: İlk olarak 1 mM stok timokin solüsyonu DMSO
içerisinde hazırlanmıştır.
T98G glioblastoma hücrelerinin hazırlanması: Stok hücreler çözüldükten sonra Dulbecco
modifiye medyumu (DMEM) içerisinde hücre plağında üretilmiştir. Çoğalan hücreler plaktan
alınarak sayılmış ve 1x105 miktarında 12 kuyucuklu plaklara yerleştirilmiştir.
Thymoquinone’nin T98G glioblastoma gen ekspresyonu üzerindeki ve fenotipik
etkilerinin araştırılması: Üremekte olan T98G hücrelerin 2 kuyucuğuna 50uM timokin, 2
kuyucuğuna 100ul timokin ve 2 kuyucuğuna da timokin solüsyonu miktarında fosfat tampon
(PBS) eklenmiştir. 48 saat RNA ekstraksiyon kiti solüsyonları eklenerek RNA elde edilmiştir.
Elde edilen RNA’lar reverse transkriptaz enzimi kullanılarak cDNA’ya dönüştürülmüştür. Bu
aşamada IFI6, MX1 ve MX2 cDNA’sına özgül olarak hazırlanmış primerler kullanılarak PZR
işlemi yapılmıştır.
BULGULAR:
Timokinin doza bağlı olarak T98G hücreleri üzerinde direk olarak hücre görüntüsü ve yapılan
MTT test sonuçlarına göre sitotoksik etkisi gözlenmiştir. Araştırırılan gen ekspresyonlarının
Relatif- PZR ile yapılan çalışma sonuçlarına göre timokin; BAX, BAD, p53, IFI-6, MX1 ve
MX2 genlerinin ekpresyonlarında azalmaya yol açmıştır. Aktin ekpresyonu internal kontrol
amaçlı bakılmıştır.
SONUÇ:
Timokinin T98G hücreleri üzerinde sitotoksik etkisi gösterilmiştir. Hücre siklusu ve apoptoz
ile ilgili genler olan BAD, BAX, p53 genlerinde bir artışın ortaya çıkmaması hücre
azalmasının apoptozdan ziyade hücre nekrozundan kaynaklandığını düşündürmektedir.
Ayrıca PZR ile gösterdiğimiz üzere IFI-6, MX1 ve MX2 sitokin genlerinin ekspresyonundaki
azalma nedeniyle timokinin antiviral koruyuculuğu şüpheli olarak değerlendirilmiş, eğer varsa
da başka sitokin veya ilgili olan genlerle yapmış olması muhtemeldir.
ANAHTAR KELİMELER: timokin, antiviral, nigella sativa, sitokin