FAST-mtDNA Sequencing Kit Mitokondrial DNA Analiz Paneli

FAST-mtDNA® Sequencing Kit
Mitokondrial DNA Analiz Paneli
Dizi Analizi Amaçlı Kullanım İçin
KULLANIM KILAVUZU
İÇİNDEKİLER
1
GİRİŞ ................................................................................................................................................ 3
2
KİT İÇERİĞİ ....................................................................................................................................... 3
3
SAKLAMA ......................................................................................................................................... 3
4
GEREKLİ MATERYAL VE CİHAZLAR ................................................................................................... 3
5
ÖNEMLİ NOTLAR VE GÜVENLİKLE İLGİLİ UYARILAR ........................................................................ 3
6
YÖNTEM .......................................................................................................................................... 4
6.1
REAKSİYON MİX HAZIRLANMASI ............................................................................................. 4
6.2
PCR AŞAMASI ........................................................................................................................... 5
7
KULLANIM KISITLAMALARI .............................................................................................................. 5
8
OLUMSUZ ETKILI MADDELER........................................................................................................... 5
SEMBOLLER ............................................................................................................................................. 5
1
GİRİŞ
Mitokondrial hastalıklar, yaşamın herhangi bir evresinde ortaya çıkabilen heterojen, kalıtsal hastalıklardır. Mitokondrial hastalıklar ile
ilişkili mutasyonlar incelenmesi nedeniyle fenotipik değişkenlik ve bireyler arasındaki genetik heterojenite bir sorun olmaya devam etmektedir.
Yeni nesil dizileme (NGS) teknolojisiyle mitokondrial dizileme, bu zorlukların bazılarına değinerek mitokondrial mutasyonların kapsamlı
algılanması ve analiz edilmesini sağlamaktadır.
FAST-mtDNA Sequencing Kit, mitokondrial DNA üzerindeki mutasyon ve varyasyonları izlemek için özel olarak geliştirilen NGS
uyumlu multipleks PCR uygulamalarına uygun bir paneldir.
2
KİT İÇERİĞİ
FAST-mtDNA Sequencing Kit Multipleks PCR Paneli (50 Reaksiyon)
3
FAST-mtDNA PCR Mix
1.7 ml (3 adet)
FAST-mtDNA Primer Mix I
150 µl (1 adet)
FAST-mtDNA Primer Mix II
150 µl (1 adet)
FAST-mtDNA Primer Mix III
150 µl (1 adet)
FAST-mtDNA Primer Mix IV
150 µl (1 adet)
FAST-mtDNA Primer Mix V
150 µl (1 adet)
SAKLAMA
Tüm bileşenler -20°C’de saklanmalıdır. Bileşenler PCR hazırlanırken oda sıcaklığında 10-15 dakikadan fazla bırakılmamalıdır.
Bileşenler uygun koşullarda saklanmaları halinde, etiketlerin üzerindeki son kullanma tarihlerine dek stabilizelerini korurlar.
4
5
GEREKLİ MATERYAL VE CİHAZLAR

Agarose jel görüntüleme sistemi

DNA izolasyon Kiti

Yeni Nesil Dizi Analiz Cihazı ve aksesuarları

Sequencing Buffer

Spektrofotometre

0.2 ml ince çeperli PCR tüpleri ya da stripler

Derin dondurucu (-20°C)

Vortex karıştırıcı

PCR Cihazı

2 ml. Mikrosantrifüj tüpleri için rotoru bulunan tezgâh üstü santrifüj

Ayarlanabilir mikropipetler

Steril, filtreli mikropipet uçları

Steril 1.5 veya 2 ml. Mikrosantrifüj tüpleri

Atılabilir eldiven
ÖNEMLİ NOTLAR VE GÜVENLİKLE İLGİLİ UYARILAR
Dikkat!

Ürün soğuk zincir altında teslim edilmelidir. Teslim alırken ambalajın soğuk zincir kurallarına uygun olup olmadığını kontrol ediniz
ve size bu şekilde ulaştırılmayan ürünleri kullanmayınız.

Ürünü teslim alırken kutu etiketlerinin üzerindeki son kullanma tarihlerini kontrol ediniz. Son kullanma tarihi geçmiş ürün veya
bileşenleri kullanmayınız.
Ürünün kullanımı esnasında aşağıda belirtilen noktalara dikkat edilmelidir:

Steril, filtreli mikropipet uçları ve steril mikrosantrifüj tüpleri kullanılmalıdır.

Çalışmaya başlanmadan önce tüm bileşenler oda sıcaklığına getirilmelidir. Kullanılmadan önce içeriklerinin homojen hale
gelmesini sağlamak için, tüm bileşenler çözdürüldükten sonra karıştırılmalı ve kısaca santrifüjlenmelidir.

Kit bileşenleri reaksiyon hazırlanana dek buz ya da soğutucu blok üzerinde tutulmalı ve kullanımın ardından hemen -20ºC’ye
kaldırılmalıdır.

PCR ve nükleik asit izolasyonu farklı kompartımanlarda/yerlerde/bölümlerde yapılmalıdır. Örnekler, kit bileşenleriyle temas
etmemeleri için ayrı bir yerde muhafaza edilmelidir.
Herhangi bir risk durumu oluşturmaması için aşağıda belirtilen güvenlik talimatlarına uyulmalıdır:

Klinik örneklerle çalışılırken çok dikkatli olunmalıdır: Örneklerle fiziksel temastan kaçınılmalıdır; laboratuvar önlüğü ve eldiven
giyilmeli, çalışma alanında yeme ve içmeye izin verilmemeli, görevli olmayan kimselerin çalışma alanına girişi engellenmelidir.
6

Nükleik asit izolasyonu aşamasında oluşan atıklar, tıbbi atığa atılmalı ve güvenli bir biçimde uzaklaştırılmalıdır.

Daha detaylı bilgi için www.multigen.com.tr adresindeki güvenlik bilgi formuna bakabilirsiniz.
YÖNTEM
6.1 REAKSİYON MİX HAZIRLANMASI
Aşağıdaki tabloda verilen hacimlerde PCR bileşenleri her 23 µl PCR reaksiyonunda 5µl DNA örneği olacak şekilde hesaplanmıştır.
Pipetleme hatalarına karşı hazırlanan PCR mix bir ya da iki reaksiyon fazladan hazırlanabilir. Bütün bileşenler kullanılmadan önce
vortekslenmelidir.
Tablo 6.1 Reaksiyon Mix İçeriği
Bileşen
Miktar
mtDNA PCR Mix
20 µl
mtDNA Primer Mix
3 µl
DNA Örneği (50-150 ng)
5 µl
Reaksiyon Mix Toplamı
28 µl
6.2 PCR AŞAMASI
Tablo 6.2 PCR Termal Profili.
Sıcaklık
Süre
98 ˚C
1 dk.
98 ˚C
10sn
56 ˚C
30 sn.
72 ˚C
150 sn.
98 ˚C
10 san
56 ˚C
30 sn.
72 ˚C
150 sn.*
72 ˚C
10 sn.
4 ˚C
∞
Başlangıç denatürasyonu
10 döngü
20 döngü
*+15 sn./döngü
7
KULLANIM KISITLAMALARI



8
Tüm bileşenler vücut dışında tanı amaçlı olarak kullanılabilir.
Bu ürün, bu kullanım kılavuzu uyarınca kullanılmalıdır.
Bu ürün özel olarak vücut dışında tanı amaçlı prosedürleri uygulama konusunda eğitim almış personel tarafından kullanılmalıdır.
OLUMSUZ ETKILI MADDELER

Heparin ya da EDTA gibi antikoagülanlar içeren tüplere toplanmış örnekler,

Hemolitik örnekler,

Heparinize olmuş hasta örnekleri,

Yüksek düzeyde safra tuzları, bilirubin ya da kan yağları içeren hastaların örnekleri
kullanılmamalıdır.
SEMBOLLER
SEMBOL
AÇIKLAMA
Son Kullanma Tarihi
Lot Numarası
Katalog Numarası
Sıcaklık Sınırlaması
Üretici
Üretim Yılı
Vücut Dışında Kullanılan Tıbbi Tanı Cihazı
Avrupa’ya Uygunluk
Test Sayısı
MULTİGEN Sağlık Hizmetleri Ltd. Şti.
ideEGE Teknoloji Geliştirme Bölgesi TGB-2 Alanı, Mercan Konteyner Park, No:172/70 D (Ofis No: 7) Erzene Mahallesi, Ankara Caddesi,
Ege Üniversitesi Kampüsü, 35100, Bornova / İZMİR
Tel: +90 232 373 73 38
Web: www.multigen.com.tr