Document

Her grubun tüpleri:
10 µl Suçlu
DNA
Örneği(CS)
Şüpheli S1 – A5
10 µl DNA Örneklei 70 µl Enzim 0,24 g
Karışımı
Agaroz
80 µl
Boyayıcı
10 µl DNAMarker
1. Restriksiyonun Hazırlanması
(8`)
1.1 Her tüpe pipet ile 10 µl enzim karışımı
ekleyin.
Her tüp
10 µl DNA
İçeriyor.
Enzim
Karışmı
(E) Miktarı(µl)
CS
S1
S2
S3
S4
Elektroforez odacığının hazırlanması
 Jel katılaştıktan sonra elektroforez
odacığının metal plakasını sökün.
 Odacığı 27F ml TAE boyayıcısı ile jelin
üzerini kaplayacak şekilde doldurun.
 Tarağı çekin.
4. DNA Markerının harırlanması
Pipet ile 10 µl tamponu (LB) 10 µl
marker’a (M) ekleyin.
5. 10 µl Tamponun Eklenmesi
10 µl tamponu CS ve S1-S5’e pipet ile
ekleyin.
S5
10 µl
10
10
10
10
10
10
6. Kuyuların Doldurulması
Her örnekten 20 µl ve 20 µl marker’ı
kuyulara doldurun.
Sırayı unutmayın!
2. Restriksiyon Sindirimi:
Test tüpleri inkübatöre
yerleştirin ve su banyosu
içerisinde 37°C’de 20
dakika bekletin.
7. Jel Elektroforezi (bei 120 V)
3. Jel Elektroforezinin Hazırlanması
3.1 Elektroforez odacığının hazırlanması
3.2 Gel üretimi:
 250 ml erlenmayerin içerisine 0,24 g
agaroz + 30 ml TAE-boyayıcısı koyun.
 Kısa bir süre erlenmayeri mikrodalga
fırında kaynatın, karıştırın ve tekrar
kaynatın.
3.3 Elektrforez odacığını jel ile doldurun.
55 °C’de jeli jel
kutusunun
içerisine dökün.
Sıcaklığı elinizin
üstü ile kontrol
edin.
Mavi bantlar jelin sonuna ulaşmadan 1 cm
önce elektroforezi durdurun.
8. DNA’yı görünür yapma.
 Jeli reklendirici çanağa aktarın ve 60 ml
renklendirici çözelti ile kaplayın.
 Renklendirici çözeltiyi erlenmayerin
içerisine dökün.
9. Jeli analiz edin.
Süphelilerden hangisi suçlu?