ELEGANCE NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY KIT

ELEGANCE
NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY KIT
REF
40 EPHE0500
40 EPHE2500
TEST
500
2500
GARANTİ
Teşhis kitinden başka açık garanti yapmayan üretici, üreticinin yazılı talimatlarına göre kullanıldığında belirlenmiş analitlerle
ölçülecektir. Teşhis kitinin başka bir amaç için kullanımı , belirtilen şeklinin dışında kullanılmasıdır ve risk kullanıcının
kendisine aittir.
Üreticilerin ticarete uygunluğu tüm veya herhangi anlaşmalı garantileri, kullanım için kanuni uygunluk veya başka amaçlar
için kullanılan anlaşmayı onaylamamaktadır. Talimatlara göre gerçekleştirildiğinde tanı kitinde ortaya çıkan az veya tam
zararın karşılanması sadece kitlerin değiştirilmesi ile sınırlıdır.
Bioclone Australia Pty Limite’in ve dağıtıcılarının tek sorumluluğu ya ürünün yenilenmesi ya da satın alma bedelinin geri
ödenmesi ile sınırlıdır. Bioclone Australia Pty Ltd, maddi hasar, kişisel yaralanma veya üründen kaynaklanan ekonomik
kayıptan sorumlu değildir.
Manufactured by Bioclone Australia Pty Limited
(a subsidiary of Hitachi Chemical Co., Ltd) ABN 14 002 036 071
71-73 Railway Parade Marrickville NSW AUSTRALIA 2204
Tel +61 (0) 2 9517 1966 Fax +61 (0) 2 9517 2990 Freecall 1800 251 138
Email sales@bioclone.com.au Web www.bioclone.com.au
EC REP
Hitachi Chemical Diagnostics Inc.
Hitachi Europa Limited Whitebrook Park,Lower Cookham Road
Maidenhead,Berkshire, SL6 8YA, UK. Phone: +44 1628 585 591
KULLANIM AMACI
ELEGANCE Neonatal Fenilalanin testi yenidoğan kan spotlarında L-fenilalanin’in kantitatif in vitro
tanısı için tasarlanmıştır. [Ayrıca " Beklenen Değerler " bölümüne bakın]
ELEGANCE TESTİN PRENSİBİ
Fenilalanin (PHE) Test Kiti, kurumuş kan spot numunelerinden fenilalanin ekstre etmek için
trikloroasetik asid (TCA) kullanır. Ekstraksiyondan sonra çözünmüş numune Fenilalanin dehidrogenaz
Enzim Reaktifi ile birleştirilir. Bu enzim reaktifi, Fenilalaninin NAD-bağımlı oksidatif deaminasyon ile
fenilpirüvat ve amonyağa dönüşümünü katalize eder . Üretilmiş NADH numunede kolorimetrik olarak
ölçülür ve bulunan fenilalanin konsantrasyonuyla doğrudan orantılıdır.
ELEGANCE SAĞLANAN REAKTİFLER, STABİLİTE VE SAKLAMA
Kit boyut - 500 test; ve 2500 test (parantez içinde).
Açılmış yada açılmamış kit ve bütün komponentler son kullanım tarihine kadar 2-8°C de saklanmalıdır.
PART No.: EKBPHE Ed. 7
Page 1
of 5
Revision date: 1 July 2009
ELEGANCE
NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY KIT
Neonatal PHE:
Enzim Reaktif
1 şişe REF # PER1
(5 şişe REF # PER1)
Stabilize edici buffer ile 3 ( 5 x 3) mL Fenilalanin dehidrogenaz. Sodyum azid, 0.01% w/v içerir.
Liyofilize edilmiş.
Enzim Reaktif Diluent
1 şişe
REF # GPD1
(1 şişe
REF # GPD5)
3 (15 ) mL Stabilize edici buffer solüsyon. Sodyum azid, 0.01% w/v içerir. Kullanıma hazır.
Koenzime Reaktif
1 şişe REF # CER1
(5 şişe REF # CER1)
Stabilize edici buffer ile 50 (5 x 50) mL NAD. Liyofilize edilmiş.
Test Buffer
1 şişe REF # PAB1
(1 şişe REF # PAB5)
Stabilizör ile 15 (75) mL buffer solüsyon. Sodyum azid, 0.01% w/v. içerir. Kullanıma hazır.
TCA
1 şişe REF # TCA1
(2 şişe s REF # TCA2)
3% w/v trikloroasetik asid (TCA) solüsyonunun 50 (2 x 125) mL. Kullanıma hazır.
Renk Reaktifi
1 şişe REF # CR1
(1 şişe REF # CR5)
3 (15) ml Bir tetrazolium tuz solüsyonu ve bir ara ürün elektron alıcı. Kullanmadan önce dilüe edilmiş
olmalı.
Neonatal PHE:
Kalibratör [A-E]
2 kart REF # EGPS1-5
(4 kart REF # EGPS1-5)
Her kart başına 5 seviye .Filtre kağıdı üzerine kurutulmuş multipl insan kanı spot kalibratörler , 5 seviye
[A-E] . Kullanıma hazır.
Neonatal PHE:
Kontrol Setleri [C1-C3]
1 kart REF # EGPC1-3
(2 kart REF # EGPC1-3)
Her kart başına 3 seviye . Filtre kağıdı üzerine kurutulmuş multipl insan kanı spot kontroller , 3 seviye
[1-3]. Kullanıma hazır.
PART No.: EKBPHE Ed. 7
Page 2
of 5
Revision date: 1 July 2009
ELEGANCE
NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY KIT
KULLANICILARI İÇİN ÖNLEMLER VE UYARILAR
Numune ve kit bileşenlerinin işlenmesi, bunların kullanımı, depolanması ve atılması herhangi bir yerel
laboratuar veya ulusal güvenlik prosedürleri veya düzenlemelerine göre yapılmalıdır.
Örnek ve Kalibratörler
Kan spotlarının kaynak malzemesi, onaylı bir akredite yöntem ile kan donörü gibi test edilmiştir ve Anti
HCV , Anti HIV ½ (AIDS) ve hepatit B yüzey antijeninin varlığı için negatif olarak bulunmuştur.
Ancak tüm numuneler kullanılırken bulaşıcı hastalık yayabilirmiş gibi düşünülmesi tavsiye edilir.
Koruyucular
Kit koruyucu olarak sodyum azid içerir. Reaktifler potansiyel olarak toksik koruyucu madde içerdiği için
işlem sırasında, yenmemesine veya cilt ile temas etmemesine dikkat edilmelidir. Sodyum azid kurşun ve
bakır borular ile reaksiyona girebilir ve potansiyel olarak patlayıcı azidler oluşturabilir .
TCA
Trikloroasetik asid yüksek derecede asidik ve aşındırıcıdır. Reaktif kullanıldığında koruyucu eldiven
giyilmelidir. Herhangi bir cilt temasından kaçınınız.
PART No.: EKBPHE Ed. 7
Page 3
of 5
Revision date: 1 July 2009
ELEGANCE
NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY KIT
ÖRNEK TOPLANMASI VE İŞLENMESİ
ELEGANCE Neonatal Fenilalanin Test Kiti, NCCLS LA4A kılavuzuna göre yeni doğanlardan iğneyle
alınan ve filtre kâğıt üzerinde kurumuş ve toplanmış topuk kan numunelerinde kullanılmak üzere
tasarlanmıştır. Numune , kalibratörler ve kontroller ile eşdeğer olduğu için filtre kâğıdı Whatman Grade
903 olmalıdır. Yeni doğanın topuğundan alınan kan doğumdan sonra 3-5 gün sonra toplanır. Filtre kağıdı
üzerindeki yuvarlak numune alanını kapsayan bir kan spotu bebeğin topuğundan delinerek alınan kanın
bir damlasının filtre kağıdı üzerine uygulaması ile elde edildi. Filtre kağıdı numune alanı kan ile tamamen
dolacak şekilde iyice emdirilmelidir. Test numunesinin toplanmasından sonra filtre kağıtları yatay olarak
kurutulmalıdır (2 saat veya daha fazla). Kuru numuneler 2-8 ° C'de 5 ay veya -20 ° C en az 2 yıl süreyle
kuru ortam altında saklanabilir. Sadece yukarıdaki şekilde hazırlanan kan spotları test edilmelidir.
GEREKLİ FAKAT SAĞLANMAYAN MATERYALLER VE EKİPMANLAR
* Deiyonize su
* Dilüsyon için kap
* Disk punch (3mm)
* Otomatik pipet
* Zaman ölçer
* Yuvarlak-tabanlı pleyt (Elusyon Pleyt A)
* Düz-tabanlı pleyt (Reaksiyon Pleyt B)
* Pleyt kapağı
* Pleyt çalkalayıcı
* Pleyt okuyucu sistem.
PROSEDÜR İLE İLGİLİ NOTLAR
Bütün numuneler ve örnekleri oda sıcaklığına(20-25°C) gelene kadar bırakın ve kullanımdan önce
yavaşça ters düz ederek karıştırın. Reaktif kirlenmesi zayıf performansa neden olabilir. Bir kalibratör
eğrisi her testte uygulanmalıdır. Bütün test adımları kesintisiz yapılmalıdır. Reaktifler her kite özeldir ve
bu nedenle farklı lot numaralı reaktifler karıştırılmamalıdır. Kullanılan fotometre ve bütün pipetler
kullanım öncesi uygun bir şekilde kalibre edilmelidir.
Kalite Kontrol
Kontrol örnekleri her testte doğru prosedür sağlamak için çalıştırılmalıdır. Kontrol değerleri test
onaylanmadan önce laboratuar aralıkları içinde kalmalıdır.
TEST PROSEDÜRÜ
Reaktiflerin hazırlanması
1. Enzim Reaktifin bir şişesini 3mL Enzim Reaktif Diluent ile çözündürün . Tarihi not edin.
2. Koenzim Reaktifin 1 şişesini 50mL deiyonize suyla çözündürün . Tarihi not edin .
Çözünmüş her şişeyi döndürerek yavaşça karıştırın ve kullanmadan önce 5 dakika bekletin. Eğer
orijinal şişeleri içinde tutulursa Enzim ve Koenzim Reaktifleri çözündürüldükten sonra 2-8 ° C'de 30
gün stabildir.
PART No.: EKBPHE Ed. 7
Page 4
of 5
Revision date: 1 July 2009
ELEGANCE
NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY KIT
Reaktifleri kuvvetlice karıştırmayın.
3. Bir full pleyt için yeterli Çalışma Enzim Reaktifi hazırlamak için 0.5mL Enzim Reaktif, 2.5mL Assay
Buffer ekleyin ve 7.5mL Koenzim Reaktif ekleyin. Döndürerek yavaşça karıştırın. Kullanmadan önce
Çalışma Enzim Reaktifi hemen hazırlayın.
4. Bir full pleyt için yeterli Çalışma Renk Reaktifi hazırlamak için 0.5mL Renk Reaktif ve 10mL
deiyonoze su ekleyin. Döndürerek yavaşça karıştırın. Kullanmadan önce hemen Çalışma Renk Reaktifi
hazırlayın.
Kalibratörler ve Kontroller
Her lot için belirlenmiş kan konsantrasyonları , kan spotlarının her seti için etiket üzerinde belirtilmiştir.
Yoğunlaşmayı önlemek için, sıcaklık dengelenmeden açmayın. Kullanılmayan kan spotlarını folyo
çanta içine koyun , ağzını iyice kaptın ve 2-8 ° C'de saklayın.
Protokol*
1. Elution Pleyt A ‘da belirlenmiş aynı kuyu içine 3 mm kan spotlarından iki adet yerleştirin ( kontrol
kalibratör ve numuneler için ). Pançlama sırasında kan spotlarının kenarlarını almaktan kaçının.
2. Her kuyu içine 100µL TCA pipetleyin. Pleyti yavaşça sallayın ve her iki kan spotunun da sıvıya
girdiğine emin olun.
3. Kapak ile Elution Peyt A’yı kapatın ve bir pleyt çalkalayıcısı üzerinde oda sıcaklığında(20-25°C) 60
dakika boyunca inkübe edin.
4. Elution Peyt A’dan 40µL ekstraktı Reaksiyon Pleyt B’in uygun kuyularına transfer edin.
5. Bütün kuyuların içine 100µL Çalışma Enzim Reaktifi pipetleyin.
6. Kapak ile Reaksiyon Pleyt B’yi kapatın ve bir pleyt çalkalayıcısı üzerinde oda sıcaklığında(20-25°C)
40 dakika boyunca inkübe edin.
7. Reaksiyon Pleyt B’nin bütün kuyuları içine 100µL Çalışma Renk Reaktifi pipetleyin. Pleytiı yavaşça
sallayın ve kuyuların içinde hava kabarcığı olmamasından emin olun.
8. Kapak ile Reaksiyon Pleyt B’yi kapatın ve oda sıcaklığında (20-25°C) sabit olarak 5 dakika süresince
inkübe edin.
9. Çift dalga boyunda 570nm ve 690nm de Reaksiyon Pleyt B’nin absorbansını ölçün. Reaksiyon Pleyt B
30 dakika gecikmeye kadar okunabilir.
[*Alternatif protokol için Teknik Özete bakın - Form # EPHETB1,].
PART No.: EKBPHE Ed. 7
Page 5
of 5
Revision date: 1 July 2009
ELEGANCE
NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY KIT
SONUÇLARIN HESAPLANMASI
Eğer otomatik veri hesaplayıcı yoksa, sonuçlarının hesaplanması manuel olarak gerçekleştirilir. Her kuyu
için OD belirleyin. Y-ekseninde OD ve x-ekseninde kalibratörün konsentrasyonu ile doğrusal grafik
kağıdı kullanarak kalibratör eğrisini çizin. Eğri çiziminde , lineer regresyon veya noktadan-noktaya eğri
modelleri kullanılabilir. Kalibrasyon eğrisi üzerinde OD verilerini kullanarak numune değeri ölçülür.
her bir numune için kan PHE mg/dL değerlerini kaydedin. ELEGANCE Yenidoğan PHE test kitinin
aralığı yaklaşık kanda 0-20 mg / dL arasındadır fakat rapor edilen maksimum konsantrasyon kullanılan
fotometre’nin lineerite performansı ile sınırlıdır. Eğer yüksek kalibratörün OD değeri fotometre
aralıklarından yukarı ise, o zaman bu kalibratör, kalibratör eğrisinin çizgisi dışında olarak kabul edilebilir.
Benzer şekilde, mikropleyt okuyucunun aralığı dışında ölçülen her hangi bir numune kabul edilen en
yüksek kalibratörden büyük olarak rapor edilmelidir.
MODEL HESAPLAMALARI
Son nokta Verisi
ID
Ave OD PHE
(mg/dL W.B.)
0.9
0.028
2.9
0.038
5.4
0.050
9.9
0.072
20.9 0.126
Numune 10.0403.4
Numune 20.0627.8
Numune 30.09815.1
KALİBRASYON
Bu kitte sağlanan kalibratörler “Amino Asid Referans Malzeme “ verilerine dayalı olarak kalibre
edilmiş ve mg/dL tam kan olarak ifade edilmiştir. 3 mm’lik kan spotundaki kanın hacmi % 55
hematokrite sahip kanın 3 μL’si olarak değerlendirilmiştir (v / v).
µmol/L’ye dönüştürmek için, 60,6 dönüşüm faktörü kullanın. 1 mg/dL = 60,6 µmol/L
SINIRLAMALAR
Test , doğumundan 48 saatten daha az süre geçmiş , kan transfüzyonu yapılmış ,ilaç almış bebeklerde ve
prematüre bebeklerde fenilalanin tespit etmek için uygulanmaz.
["Beklenen Değerler" bölümüne de bakın]
PART No.: EKBPHE Ed. 7
Page 6
of 5
Revision date: 1 July 2009
ELEGANCE
NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY KIT
BEKLENEN DEĞER
ELEGANCE Fenilalanin Test Kiti ile ölçülen fenilalanin konsantrasyonu 902 yenidoğan kurumuş kan
spot örneklerinin test edilmesi ile bir çalışmada değerlendirildi. Ortalama PHE konsantrasyonu 1mg/dL
dir. Cut-off değeri (ortalama + 3SD) 2mg/dL olarak tespit edildi. Bu cut-off değerinin yukarısındaki
numuneler muhtemel pozitif olarak kabul edildi ve tekrar test (doğrulayıcı) gecikmeden yapılmalıdır.
Fenilketonüri için bir tarama yöntemi olduğundan yüksek sonuç kesinlikle tanı koydurucu değildir.
Ancak sorun tespit edilen yenidoğanda acilen daha fazla araştırma yapılması gereğini işaret eder.
Premature, düşük doğum ağırlıklı veya hasta yenidoğan veya doğumdan sonra 48 saatten az zamanda
alınan numunelerin şüpheli fenilalanin değerleri gerçek klinik durumu ile ilgili olmayabilir. Tedavide bu
gibi klinik durumlar değerlendirilmelidir.
Her laboratuar kendi referans aralıklarını ve laboratuarın rutin popülasyonundan gelen örneklere dayalı
cut-off belirlenir ve cut-off düzeylerinden üzerindeki yenidoğanların takibini kapatmak için bir prosedür
oluşturulması şiddetle önerilir.
PERFORMANS ÖZELLİKLERİ
2-spot test
Intra-test Hassasiyet
Numune n
Mean ± 2SD
(mg/dL tam kan)
1
14
2.7 ± 0.2
2
14
7.3 ± 0.6
3
14
13.4 ± 0.6
Inter-test Hassasiyeti
Numune n * Mean ± 2SD
(mg/dL tam kan)
1
9
2.5 ± 0.5
2
9
7.6 ± 0.6
3
9
13.5 ± 1.4
* dört misli
PART No.: EKBPHE Ed. 7
%CV
3.2
4.2
2.1
%CV
10.5
3.7
5.0
Page 7
of 5
Revision date: 1 July 2009
ELEGANCE
NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY KIT
Özgüllük
Her potansiyel çapraz reaktant 11mg/dL PHE eklenir.
Amino Asid
Çapraz reaktant Konsentrastyon % PHE
(mg/dL W.B.)
Kurtarma
Alanin
20
96.2
Alanin
20
100.7
Arginin
20
102.2
Aspartik Asid
20
104.0
Sistein
20
101.6
Glutamik Asid
20
102.0
Glisin
20
103.1
Histadine
20
97.7
Hidroksiprolin
20
98.2
Lösin
20
101.2
Metionin
20
95.3
Proline
20
100.4
Serine
20
94.1
Triptofan
20
99.2
Tirozin
20
100.2
Valin
20
95.9
Doğruluk
Gerialma, dışsal analitin eklenmesinden önce ve sonra test edilmesi ile hesaplandı.
NumuneGözlenen PHE Beklenen PHE %Kurtarma
(mg/dL W.B.) (mg/dL W.B.)
1
5.4
5.2
104.3
2
8.2
8.0
102.1
3
12.9
12.8
100.7
Dilüsyon
Bir numune sıfır kalibratör ile dilüe edildi , test edildi ve geri alma hesaplandı .
Numune Gözlenen PHEBeklenen PHE% Kurtarma
(mg/dL W.B.) (mg/dL W.B.)
Numune 10.0
1/2
5.0
1/4
2.5
Duyarlılık
5.0
2.5
99.9
101.3
Testin duyarlılığı genellikle 0.2 mg/dL PHE tam kandan daha azdır. Duyarlılık doz tepki değişkenine
(OD) karşılık gelen analitin konsantrasyonu olarak tanımlanır bu bir test çalışmasında sıfır kalibratörün
12 kez çoğalmasının belirlenmesinde tahmin edilen sıfır noktasındaki iki standart sapmasıdır.
PART No.: EKBPHE Ed. 7
Page 8
of 5
Revision date: 1 July 2009
ELEGANCE
NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY KIT
Etkileşim
Analit gerialımında 1350 mg / dL trigliserid, 10 mg / dL bilirubin ve 20 mg / dL hemoglobin
konsantrasyonunda hiçbir etkileşim gözlenmedi .
SİPARİŞ BİLGİ VE TEKNİK SERVİS
ELEGANCE NEONATAL PHENYLALANINE ASSAY kiti
Bioclone Australia Pty Limited,
71-73 Railway Parade, Marrickville
NSW 2204, AUSTRALIA.’nın bir ürünüdür.
Telephone +61 (0) 2 9517 1966
Fax
+61 (0) 2 9517 2990
Email sales@bioclone.com.au
Freecall
Web
1800 251 138
www.bioclone.com.au
TEKNİK SERVİS
Tam teknik servis Bioclone +61 (0) 2 9517 1966 yada Freecall 1800 251 138 aranarak kullanılabilir.
Manufactured by Bioclone Australia Pty Limited
(a subsidiary of Hitachi Chemical Co., Ltd) ABN 14 002 036 071
71-73 Railway Parade Marrickville NSW AUSTRALIA 2204
Tel +61 (0) 2 9517 1966 Fax +61 (0) 2 9517 2990 Freecall 1800 251 138
Email sales@bioclone.com.au
Web www.bioclone.com.au
PART No.: EKBPHE Ed. 7
Page 9
of 5
Revision date: 1 July 2009