(8`) 2. Restriksiyon Sindirimi: 3. Jel Elektroforezinin Hazırlanması 4
advertisement
Her grubun tüpleri: 10 µl Suçlu DNA Örneği(CS) Şüpheli S1 – A5 10 µl DNA Örneklei 70 µl Enzim 0,24 g Karışımı Agaroz 80 µl Boyayıcı 10 µl DNAMarker 1. Restriksiyonun Hazırlanması (8`) Enzim Karışmı (E) Miktarı(µl) CS S1 S2 S3 S4 4. DNA Markerının harırlanması Pipet ile 10 µl tamponu (LB) 10 µl marker’a (M) ekleyin. 5. 10 µl Tamponun Eklenmesi 10 µl tamponu CS ve S1-S5’e pipet ile ekleyin. 1.1 Her tüpe pipet ile 10 µl enzim karışımı ekleyin. Her tüp 10 µl DNA İçeriyor. Elektroforez odacığının hazırlanması • Jel katılaştıktan sonra elektroforez odacığının metal plakasını sökün. • Odacığı 27F ml TAE boyayıcısı ile jelin üzerini kaplayacak şekilde doldurun. • Tarağı çekin. S5 10 µl 10 10 10 10 10 10 6. Kuyuların Doldurulması Her örnekten 20 µl ve 20 µl marker’ı kuyulara doldurun. Sırayı unutmayın! 2. Restriksiyon Sindirimi: Test tüpleri inkübatöre yerleştirin ve su banyosu içerisinde 37°C’de 20 dakika bekletin. 7. Jel Elektroforezi (bei 120 V) 3. Jel Elektroforezinin Hazırlanması 3.1 Elektroforez odacığının hazırlanması 3.2 Gel üretimi: • 250 ml erlenmayerin içerisine 0,24 g agaroz + 30 ml TAE-boyayıcısı koyun. • Kısa bir süre erlenmayeri mikrodalga fırında kaynatın, karıştırın ve tekrar kaynatın. 3.3 Elektrforez odacığını jel ile doldurun. 55 °C’de jeli jel kutusunun içerisine dökün. Sıcaklığı elinizin üstü ile kontrol edin. Mavi bantlar jelin sonuna ulaşmadan 1 cm önce elektroforezi durdurun. 8. DNA’yı görünür yapma. • Jeli reklendirici çanağa aktarın ve 60 ml renklendirici çözelti ile kaplayın. • Renklendirici çözeltiyi erlenmayerin içerisine dökün. 9. Jeli analiz edin. Süphelilerden hangisi suçlu?