184 BP-168 Gökkua Alabalk Karacierinden Glukoz 6-Fosfat Dehidrogenaz Enziminin Saflatrlmas ve Karakterizasyonu Veysel Çomakl, Ebru Akkemik, Ö.rfan Küfreviolu, Mehmet Çiftci Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya Bölümü, 25240, Erzurum, Türkiye veysel.comakli@atauni.edu.tr Glukoz 6-fosfat dehidrogenaz (D-glukoz 6-fosfat: NADP+ oksidoredüktaz EC 1.1.1.49; G6PD) pentoz fosfat yolunun ilk ve kilit enzimidir. Pentoz fosfat yolunda glukoz 6-fosfat, riboz 5-fosfata dönüürken NADPH üretilir. Bu be karbonlu eker ve onun türevleri, ATP, CoA, NAD+, FAD, RNA ve DNA gibi hayati öneme sahip biyomoleküllerin bileenleridir. Pentoz fosfat yolu birçok doku ve hücrede oldukça önemli bir yere sahiptir [1]. Karacierde, ksenobiyotiklerin detoksifikasyonunda NADPH’a ihtiyaç vardr. NADPH’larn büyük bir çounluu Pentoz Fosfat yolundan salanr [2]. Bu çalmada G6PD enziminin gökkua alabalk karacierinden saflatrlmas ve karakterizasyonu amaçlanmtr. Bu amaçla G6PD enzimi, gökkua alabalk karacierinden saflatrld. Saflatrma ilemi homojenatn hazrlanmas, amonyum sülfat çöktürmesi ve 2',5'-ADP Sepharose-4B afinite kromatografisi olmak üzere üç basamakta gerçekletirildi. Enzim aktivitesi Beutler metoduna göre 340 nm’de spektrofotometrik olarak belirlendi [3]. Enzim saflnn kontrolü için SDS-PAGE yapld. Ayrca jel filtrasyon kromatografisi ile tabi molekül kütlesi bulundu. Saflatrlan enzimin optimum pH s 7,5, optimum iyonik iddeti 0,12 mM (K-Fosfat), optimum scakl 50ºC olarak belirlendi. NADP+ ve G6P substratlar için KM ve Vmax deerleri, turnover says ve kcat/KM deeri hesapland. KAYNAKLAR [1] Akkemik, E, “Baz laçlarn nsan Eritrositlerinden Saflatrlan Glukoz 6-Fosfat Dehidrogenaz Ve 6-Fosfoglukonat Dehidrogenaz Enzim Aktiviteleri Üzerine Etkilerinin ncelenmesi”.Atatürk Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, 1-142, 2009 [2] Keha E, Küfreviolu Ö.. Biyokimya, Aktif yaynevi, Erzurum 2010 [3] Beutler, E. In: Beutler E, Lichtman MA, Coller BS, Kipps TJ, eds. Williams Hematology 5th edn. Mc Graw-Hill Company, New York, 564-581. 1995,