BAÜ FEF 2. Öğretim 2010 Bahar Moleküler Biyoloji 2 Arasınavı (13.04.2010) Süre 60dk’dır. ANAHTAR 1. Trp operonunun, Lac operonu ve Arabinoz operonundan en önemli farkını belirterek bunun nasıl ve neden mümkün olduğunu kısaca açıklayınız. (4p) Trp operonunun bu iki operondan en önemli farkı atenuasyon aracılığıyla translasyon yoluyla transkripsiyonun kontrol edilebilmesidir. Bu durum prokaryotlarda çekirdek olmadığı ve dolayısıyla translasyon ve transkripsiyonun aynı anda cereyan edebilmesinden dolayı mümkündür. 2. - LacI mutasyonlarının genin 5’ bölgesinde, LacS mutasyonlarının ise genin daha aşağı (3’) bölgesinde bulunduğu tespit edilmiştir. Bu bilgi repressörün işlevleriyle uyumlu mudur? evet veya hayır yazarak nedenini açıklayınız (10p) 3. Aşağıdaki genotiplerin ne anlama geldiğini/fenotipini açıklayarak laktozlu ve laktozsuz ortamda operonun çalışıp çalışmayacağını belirtiniz (12p) a) I O+Z+/F’I+ Fenotip: Repressör bozuk plazmitle sağlam repressör transfer edilmiş Laktoz var: Çalışır Laktoz yok: Çalışmaz b) I+OCZ+/F’O+Z+ Fenotip: Operatör bozuk plazmitle sağlam operatör ve β-galaktozidaz transfer edilmiş. Biri bozuk diğeri sağlam iki operon oluşmuş. Laktoz var: Her ikisi de çalışır. Laktoz yok: Bozuk çalışır, yeni transfer edilen çalışmaz 4. “Şapka”, “kuyruk” ve “fazlalıklar” gen ekspresyonu konusunda size tam olarak ne ifade eder? Bunlardan kontrol amaçlı kullanılan var mıdır? varsa bu kontrol nasıl olur? (10p) Şapka ökaryotlardaki öncül mRNA’nın 5’ ucuna eklenen 7 metil guanozini, kuyruk aynı mRNA’nın sonuna eklenen poli A kuyruğunu, fazlıklar da aynı mRNA’dan kesilerek çıkarılan intronları ifade etmektedir. Poli A kuyuğunun uzun veya kısa olması mRNA’nın ömrününun uzatılıp kısaltılması için kullanılır. İntronların çıkarılması esnasında da, seçenekli splays yoluyla bir intron bazen ekzon (veya bir ekzon bazen intron) olacak şekilde tercih yapılabilir. 5. 8. [D] [Y] Gerçek Tx faktörleri RNA polimeraz ile direk temas etmeden Tx başlamaz. (2p) 9. [D] [Y] TATA kutusu hem prokaryot hem de ökaryotlarda bulunur ancak bazı konstitütif genlerde bulunmaz (2p) 10. [D] [Y] Drosophila’da TRA proteini alternatif splyasla oluşurken DSX-F ve DSX-M proteinlerinde tek tip mRNA söz konusudur (2p) 11. RISC ne demektir? nelerden oluşur? nasıl çalışır? ne işe yarar? kısaca açıklayınız. (8p) RISC “RNA Induced Silencing Complex” (RNA tarafından başlatılan gen susturma kompleksi) demektir. Küçük etkileyici RNA (siRNA), RNA kesici enzim Dicer ve bazı proteinlerden oluşan bir komplekstir. Önce dicer’lar siRNA oluşturur, 12. Restriksiyon enzimlerinin tanıma bölgelerinin özelliklerini belirterek bu tanıma/kesim bölgelerinin nasıl farklılıklar gösterdiklerini birer örnekle açıklayınız. (8p) 13. 5’GAATTC-3’ |||||| 1. Palindromiktir. Örnek: EcoRI 3’CTTAAG-5’ (soldan sağa ve sağdan sola aynı (GAATTC) okunduğuna dikkat ediniz). 2. Kesim bölgesinde en az 4 olmak üzere değişken sayıda nükleotit olabilir. Örnek MspI: CCGG, NotI: GCGGCCGC 3. Kesim sonucu küt veya salınan (yapışkan) uçlar oluşabilir. Örnek küt: SmaI CCC↓GGG, Örnek Yapışkan EcoRI 5’G↓AATTC-3’ 3’CTTAA↑G-5’ 14. Genomuna dair hiçbir bilgi ve çalışmanın olmadığı Afrika okapisinin genomik DNA kütüphanesini yaptınız ve bu canlının betaglobin genini izole etmek istiyorsunuz. İnsan beta-globin geninin nükleotid dizisi bilgisini kullanarak okapi beta-globin genini izole etmek için kullanabileceğiniz iki strateji ne olabilir? Bu stratejileri adım adım anlatınız. (10p) Ökaryotlarda gen regülasyon aşamalarını listeleyiniz (6p) 1. Transkripsiyonel kontrol 2. Splays regülasyonu 3. Aktarım regülasyonu 4. Translasyonel regülasyon 5. Translasyon sonrası regülasyon 6. mRNA yıkımının regülasyonu 6. Bir DNA molekülünün hücre içinde metillenip metillenmediğini anlamak için nasıl bir deney yaparsınız? PCR ile çoğaltılan DNA’nın metilsiz olacağını dikkate alarak cevabınızı metin olarak anlatınız veya şekille gösteriniz. 10p Bu molekülü 2 gruba ayırıp birinci grubu MspI enzimi ile ikinci grubu ise HpaII enzimi ile keseriz. Sonra bu molekülü çoğaltan primerlerle PCR yaparız. Eğer her iki enzimle aynı sayıda ve büyüklükte band oluşmuşsa metilasyon yoktur farklı bandlar oluşursa metilasyon vardır. 7. Enhancer ve promotorun benzer ve farklı özelliklerini yazınız (6p) Benzer yanları: her ikisi de DNA düzeyinde görev yapan cis elementlerdir. Her ikisine de tx faktörleri bağlanır. Farklılıklar: Promotor genin 5’ tarafında olurken enhanser 5’ tarafında 3’ tarafında hatta bazen genin içinde bile olabilir. Promotor hem prokaryot hem ökaryotlarda bulunur enhanser çoğunlukla sadece ökaryotlarda bulunur. 15. Tipik bir PCR reaksiyonunun temel aşamaları …………………, ……………………., ve ……………………… dır. 7 temel komponenti ise …………., …………., …………., …………., …………., …………., …………., olarak bilinir. (10p)