Hindi Karaciğerinden Glutatyon Redüktaz Enziminin Saflaştırılması

Kromatografi 2010
16-19 Haziran.-' Erzurum
P63
Hindi Karaciğerinden Glutatyon Redüktaz Enziminin Saflaştırılması ve
Karakterizasyonu
Pınar Taser", Mehmet Çiftçi"
"Atatürk Üniversitesi, Fen Fakültesi, Kimya Bölümü, Erzurum
ptaser@atauni.edu.tr
Glutatyon redüktaz (NADPH; GSSG oksidoredüktaz, E.C. 1.6.4.2) okside glutatyonun indirgenmiş
glutatyona dönüşümünü sağlayan, oksidoredüktaz enzim ailesinin bir üyesidir [1]. Glutatyon redüktazın bilinen
en önemli fonksiyonu GSH/GSSG oranını yükselterek hücre içi -SH/-SS- oranını korumaktır.
Bu çalışmada glutatyon redüktaz enziminin hindi karaciğerinden saflaştırılması ve karakterizasyonu
amaçlanmıştır.
Bu amaçla taze hindi karaciğerinde homojenat hazırlandı ve amonyum sülfat çöktürmesi yapıldı. Elde
edilen çökelek uygun tamponda çözülüp diyaliz edildikten sonra, sırasıyla DEAE-Sephadex iyon değişim
kromatografi s i ve 2',5'-ADP Sepharose-4B afınite kromatografısi yöntemleri ile dört kademede saflaştırıldı [2].
SDS-PAGE ile enzimin saflığı kontrol edildi.
Enzim aktivitesi Beutler metoduna göre 340 nra'de
spektrofotometrik olarak belirlendi [3].
Saflaştırılan enzim için; optimum sıcaklık, optimum pH, optimum iyonik şiddet, stabil pH belirlendikten
sonra NADPH ve GSSG substratları için KM ve Vmax değerleri hesaplandı [4].
Kaynaklar:
1. Müler F. Chemistry & Biochemisry of Flavoenzymes; Williams C.H., Ed.; CRC Pres: Boca Raton, Florida,
121-211, 1992.
2. Erat, M and Çiftçi, M. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 18, 545-550. 2003.
3. Beutler, E. in: Beutler E. Lichtman MA, Goller BS, Kipps TJ. eds. Williams Hematology 5th edn. N4c GrawHill Company, Nevv York, 564-581. 1995,
4. Erat, M. İnsan ve Sığır Eritrosit Glutatyon Redüktase Enziminin Saflaştırılması, Karakterizasyonu, Bazı İlaç
ve Kimyasal Maddelerin İnhibisyon ve Aktivasyon Etkilerinin Araştırılması. 70-73, 2002.
Posterler