Çok ilaca dirençli Mycobacterium tuberculosis izolatlarının hızlı
advertisement
Çok ilaca dirençli Mycobacterium tuberculosis izolatlarının hızlı tespitinde kristal viyole renksizleştirme testinin (KVRT) değerlendirilmesi: Çok merkezli bir çalışma Ahmet Yılmaz Çoban1, Ahmet Uğur Akbal1, Can Biçmen2, Ali Albay3, Ali Korhan Sığ3, Meltem Uzun4, Deniz Sertel Şelale4, Nuri Özkütük5, Süheyla Sürücüoğlu5, Aydan Özkütük6, Nuran Esen6 1Ondokuz 2Dr. Mayıs Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji AD, Samsun Suat Seren Göğüs Hastalıkları ve Cerrahisi EAH, Mikrobiyoloji Laboratuvarı, İzmir 3Gülhane Askeri Tıp Akademisi (GATA), Tıbbi Mikrobiyoloji AD, Ankara 4İstanbul Üniversitesi İstanbul Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji AD, İstanbul 5Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji AD, Manisa 6Dokuz Eylül Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji AD, İzmir Çalışmanın amacı Çok ilaca dirençli Mycobacterium tuberculosis izolatlarının hızlı tespiti için KVRT’nin çok merkezli olarak değerlendirilmesi Bakteri İzolatları Çalışmada 6 merkezde toplam 115 M. tuberculosis izolatı test edildi Ondokuz Mayıs Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji, 25 izolat İstanbul Üniversitesi İstanbul Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji, 17 izolat Ankara GATA, Tıbbi Mikrobiyoloji, 20 izolat Dr. Suat Seren Göğüs Hastalıkları ve Cerrahisi EAH, Mikrobiyoloji Laboratuvarı, İzmir, 19 izolat Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji, 19 izolat Dokuz Eylül ÜniversitesiTıp Fakültesi, Tıbbi Mikrobiyoloji, 15 izolat Besiyeri Middlebrook 7H9S besiyeri 0.1% kaziton, 0.5% gliserol ve 10% OADC içeren Bakteri inokülümünün hazırlanması Löwenstein-Jensen besiyerinde üremiş taze bakteri kolonileri 5 ml SF ve 15-20 adet steril cam boncuk içeren tüplere alındı 1-2 dakika vortekslendi Dik pozisyonda, oda sıcaklığında 30 dakika bekletilerek aerosollerin ve büyük partiküllerin çökmesi sağlandı McFarland 1 standardına ayarlandı Kristal viyolenin hazırlanması Kristal viyole boyası steril distile su ile; 25 µg/mL son konsantrasyonda hazırlandı Filtre ile steril edildi Kullanılıncaya kadar +4C’de saklandı. Çalışmanın aynı standart şartlarda yapılabilmesi için besiyerleri OMÜ Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji AD tarafından hazırlanıp diğer merkezlere gönderildi Ayrıca test sırasında kullanılacak olan kristal viyole (KV) solüsyonu (25 mg/L) da aynı merkezde hazırlanıp besiyerleri ile beraber gönderildi Antibiyotik konsantrasyonları INH; 0.25 µg/mL konsantrasyonda RIF; 0.5 µg/mL konsantrasyonda test edildi Her bakteri için üç tüp kullanıldı 1 adet antibiyotik içermeyen üreme kontrol besiyeri (1 ml) 1 adet 0.25 mg/L INH içeren besiyeri (1 ml) 1 adet 0.5 mg/L RIF içeren besiyeri (1 ml) Her bir bakterinin hazırlanan inokülümlerinden her tüpe 50 µl inoküle edildi Çalışmada bakteriler inoküle edildikten sonra 37°C’de inkübasyona bırakıldı. İnkübasyonun 7. gününde her bir tüpe 100’er µl KV solüsyonu eklendi ve tekrar inkübasyona bırakıldı. Tüpler renksizleşmenin gözlendiği güne kadar her gün kontrol edildi. Üreme kontrol besiyerinde renksizleşme saptanınca test sonuçlandırıldı Sonuçların karşılaştırılması KVRT Referans Yöntem* Dirençli Dirençli 44 Duyarlı Duyarlı 2 65 Dirençli 43 2 RIF * MGIT 960 otomatize sistemi 0 Özgüllük PPV NPV (%) (%) (%) (%) Uyumluluk (%) 91,6 97 95,6 94,2 94,78 95,5 100 100 97,2 98,2 4 INH Duyarlı Duyarlılık 70 Süre Sonuç Sayısı 8 gün 13 9 gün 8 10 gün 31 11 gün 12 12 gün 5 13 gün 10 14 gün 10 15 gün 2 16 gün 5 18 gün 2 20 gün 18 21 gün 1 31 gün 3 Testlerin ortalama sonuçlanma süresi 13.05±4.7 gün S1 S2 R3 S2 R5 R3 R5 Sonuç KVRT testi çok ilaca dirençli M. tuberculosis izolatlarının tespiti için kullanılabilecek yeni, hızlı, ucuz ve güvenli bir yöntem olarak görülmektedir.
