T.C. ESKİŞEHİR OSMANGAZİ ÜNİVERSİTESİ REKTÖRLÜĞÜ İDARİ VE MALİ İŞLER DAİRE BAŞKANLIĞI BİLİMSEL ARAŞTIRMA PROJELERİ SATINALMA ŞUBE MÜDÜRLÜĞÜ Sayı Konu : 59348463-604-01-02 [SP.2.10]/ 2587 : Doğrudan Temin Teklif Belgesi GÜNLÜDÜR 17 /09/2014 ESKİŞEHİR 4734 sayılı KİK.nun 3. Md.nin (f) bendi uyarınca yürütülen ve desteklenen araştırma-geliştirme projeleri için gerekli mal ve hizmetlerin alımları için düzenlenen esas ve usullerin (21/d) Md.ne göre doğrudan temin usûlü ile alımı yapılacak olan aşağıda cins ve miktarı yazılı malzemeler / cihazlar için KDV Hariç tekliflerinizi en geç 23 / 09 / 2014 tarih ve saat.16.30’a kadar aşağıdaki bilgiler dâhilinde Üniversitemiz Bilimsel Araştırma Projeleri Satınalma Birimine vermenizi rica ederim. Ali KANBER Satınalma Şube Müdürü S. N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 MİKT. 2 kutu 1 kutu 1 kutu 2 kutu 2 kutu 2 kutu 3 kutu 1 kutu 3 kutu 2 kutu 2 kutu MALIN/HİZMETİN CİNSİ BİRİM FİYATI TOPLAM TUTAR RNeasy Plus Mini Kit RT First Strand Kit RT Strand Kit RT qPCR Primer Assay PCR master mix Qiamp DNA mini Kit EpiTect Bisulfite Kit METBN-0,02/Standard Primer EpiTect HRM PCR Kit EpiTect Control DNA, unmethylated EpiTect Control DNA, methylated Not:Teknik Şartnamesi vardır. Şartnameler 0 222 239 37 50 /5527 ‘den temin edebilirsiniz NOTLAR: 2014/11A211 kod nolu proje için, teklifler 23 / 09 / 2014 saat 16.30’a kadar ESOGÜ.Bilimsel Araştırmalar Birimi Satın alma Servisine elden veya kargo ile getirilmelidir. Teklif mektubuyla beraber teknik şartnameye cevaplar ile katalog, broşür vb. belgeler verilmelidir. kaç günde teslim edileceği belirtilecektir. KISMİ TEKLİF VERİLEBİLİR. ALTERNATİF TEKLİF VERİLMEYECEKTİR. Teklif edilen cihazların markaları ve modelleri teklif mektubunda ayrıntılı olarak belirtilmelidir. ilerinden birbirini teyit etmeyen ve yukarıdaki şartları taşımayan teklif mektupları değerlendirmeye alınmaz. Malzemeler İdari ve Mali İşler Daire Başkanlığına bilgi verilerek, elden teslim edilmelidir. (Kargo Teslimatı Kabul Edilmeyecektir.) Malzeme teslim irtibat numarası : 0 222 239 37 97 / 0 222 239 59 56 / 0 222 239 37 50 - 5501 İdari bilgi için= Tel: 0 222 239 37 50-5526-5527 Fax: 0 222 239 39 03 Teknik Bilgi için: Tıp Fak.Hematoloji BD.Doç.Dr.Eren GÜNDÜZ /0222 239 29 79 / Adres:Meşelik Kampüsü-ESKİŞEHİR Tel:0.222.2393750-5525-5526 Fax:0.222.2393903 Bil.Arş Prj. Satınalma Şubesi http.www.ogu.edu.tr/~ihal TEKNİK ŞARTNAME Makine-Teçhizat 1. Teknik Özellikleri: Sayfa 26 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi 1. RNeasy Plus Mini Kit Teknik Özellikleri: a) Kit ile hücre, doku ve mayalardan total RNA izolasyonu yapılabilmelidir. b) Kit ile elde edilen RNA'lar 200 bp'den büyük olmalıdır. c) Kit silika membran bazlı spin kolon prosedürü ile çalışmalıdır. d) Kit fenol ve kloroform gibi toksik ve kanserojen maddeleri içermemelidir. e) Başlangıç materyali olarak en fazla 1x107 hücre, 3 mg doku, 5x107 maya kullanılabilmelidir f) Kit prosedürü örneğin lize edilmesi, RNA'nın kolona bağlanması, yıkama ve elusyon basamaklarından oluşmalıdır. g) Kit ile elde edilen ürün miktarı lxl6 hücreden 1-35ug, 1 mg dokudan 1-6 ug, 1x107 maya hücresinden 25 mg olmalıdır. h) Kitin kullanımı sırasında başlangıç materyalinin saklandığı tüpler haricinde ekstra tüpe ihtiyaç duyulmadan prosedürün basamaklan arasındaki tüp ihtiyaçları kitin içerisinden sağlanmalıdır. i) Kit içerisinde test miktar kadar spin kolonlar ve protokolün gerektirdiği sayıda 2 ml' lik toplama tüpleri bulunmalıdır. j) Kit ile elde edilen ürünler RT-PCR, Q-RT-PCR, cDNA sentezi, northern, dot, slot blot, Poly A RNA Secimi ve mikroarray çalışmalarında kullanılabilmelidir. 2. RT First Strand Kit Sayfa 27 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi Teknik Özellikleri: 1. Kit ile belirlenen en az 1 adet genin ekspresyon profili incelenebilmelidir. 2. Ekspresyon paketi kapsamında 100 örneklik doku stabilizasyon reaktifi, 100 örneklik doku/hücreden total RNA izolasyon kiti, 100 örneklik cDNA sentez kiti, en az 1 adet "gene of interest" +1 adet "housekeeping gene" 'in herbiri için 200'er raksiyonluk primer setleri ve toplamda 200 reaksiyonluk SYBR Green mastermix verilmelidir. 3. Paket kapsamında verilen total RNA izolasyon kiti sonraki çalışmalar için miRNA'ları da izole edebilmelidir. 4. Ekspresyon eş zamanlı olarak görüntülenebilmelidir. 5. Kit isteğa bağlı olarak ABI, Bio-Rad, Eppendorf, QIAGEN, Roche, Stratagene ve TaKaRa marka PCR cihazlarına uygun olacak formatta üretilebilmelidir. 6. Gen ekspresyonu SYBR Green temelli real time PCR protokolü ile çalışmalıdır. 7. Kit içeriğindeki içeriği kullanıcı talebine göre insan, sıçan ve fare örnklerine uygun olmalıdır. 8. Universal tailing özelliğine sahip olmalı ve böylece miRNA ve mRNA ayrımına gerek kalmamalıdır. 9. Analiz için gerekli olan kolon yöntemli RNA izolasyon kiti, cDNA kiti, Sybr Green prensibine uygun master mix yeterli miktarlar paket olarak teslim edilmeli ve sonuçların doğruluğu için her biri aynı markadan temin edilmelidir. 10. Tüm assayler wet-bench valide olmalıdır ve böylece primer performansı garantilenmelidir. 11. Primerler mix, forward ve reverse aynı tüpte liyofilize halde teslim edilmelidir. 12. Teklif veren firma örneklerin toplanmasından data analizine kadar komple sistemi önerebilmelidir. 13. Teklif verilen paketteki malzemelerin hepsi aynı marka olmalı, bu şekilde gen ekspresyon sonuçları %100 garantili değerlendirilebilmelidir. 14. Pakette yer alan ürünlerin üreticisi tarafından geliştirilen bir data analiz yazılımı sayesinde sonuçlar on-line olarak değerlendirilebilmelidir. 15. Data analiz yazılımı ücretsiz ve herkezin ulaşabildiği bir internet sayfası üzerinden kullanılabilmeli, analizi ΔΔCT yöntemi ile gerçekleştirmelidir. 16. Paket içerisinde önerilen cDNA kiti ekstra sarfa ihtiyaç duyulmaksızın Dna kontaminasyonunu elimine etmelidir. 17. Ekspresyon kiti ile verilecek cDNA kiti ile öncelikle 42⁰C'de 5 dk boyunca gDNA'lar elimine edilmeli, daha sonra ikinci bir cycle ile cDNA sentezi yapılmalıdır. 18. Ekspresyon kiti ile verilecek SYBR Green Mastermix, primerler ve cDNA sentez kiti aynı ürün grubuna ait olup, üçünün birlikte kullanımıyla optimizasyon gerektirmeksizin ilk çalışmada sonuç alınacağı firma tarafından garanti edilmelidir. 19. Ekspresyon kiti ile verilecek SYBR Green Mastermix kontaminasyonu engellemek amacıyla 1.35ml'lik tüplerde verilmelidir. 20. Ekspreyon kiti ile verilcek RNA izolasyon kiti özellikleri aşağıdaki gibi olmalıdır; a) Kit ile hücre, doku ve mayalardan total RNA izolasyonu yapılabilmelidir. b) Kit ile elde edilen RNA'lar 200 bp'den büyük olmalıdır. c) Kit silika membran bazlı spin kolon prosedürü ile çalışmalıdır. d) Kit fenol ve kloroform gibi toksik ve kanserojen maddeleri içermemelidir. e) Başlangıç materyali olarak en fazla 1x107 hücre, 3 mg doku, 5x107 maya kullanılabilmelidir f) Kit prosedürü örneğin lize edilmesi, RNA'nın kolona bağlanması, yıkama ve elusyon basamaklarından oluşmalıdır. g) Kit ile elde edilen ürün miktarı lxl6 hücreden 1-35ug, 1 mg dokudan 1-6 ug, 1x107 maya hücresinden 25 mg olmalıdır. h) Kitin kullanımı sırasında başlangıç materyalinin saklandığı tüpler haricinde ekstra tüpe ihtiyaç duyulmadan prosedürün basamaklan arasındaki tüp ihtiyaçları kitin içerisinden sağlanmalıdır. i) Kit içerisinde test miktar kadar spin kolonlar ve protokolün gerektirdiği sayıda 2 ml' lik toplama tüpleri bulunmalıdır. j) Kit ile elde edilen uriinler RT-PCR, Q-RT-PCR, cDNA sentezi, northern, dot, slot blot, Poly A RNA Secimi ve mikroarray çalışmalarında kullanılabilmelidir. 21. Teklif veren firma çalışma boyunca istenildiğinde kullanıcıya aplikasyon desteği verebilmelidir. 3. RT Strand Kit Sayfa 28 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi Teknik Özellikleri: 1. Kit ile belirlenen en az 1 adet genin ekspresyon profili incelenebilmelidir. 2. Ekspresyon paketi kapsamında 100 örneklik doku stabilizasyon reaktifi, 100 örneklik doku/hücreden total RNA izolasyon kiti, 100 örneklik cDNA sentez kiti, en az 1 adet "gene of interest" +1 adet "housekeeping gene" 'in herbiri için 200'er raksiyonluk primer setleri ve toplamda 200 reaksiyonluk SYBR Green mastermix verilmelidir. 3. Paket kapsamında verilen total RNA izolasyon kiti sonraki çalışmalar için miRNA'ları da izole edebilmelidir. 4. Ekspresyon eş zamanlı olarak görüntülenebilmelidir. 5. Kit isteğa bağlı olarak ABI, Bio-Rad, Eppendorf, QIAGEN, Roche, Stratagene ve TaKaRa marka PCR cihazlarına uygun olacak formatta üretilebilmelidir. 6. Gen ekspresyonu SYBR Green temelli real time PCR protokolü ile çalışmalıdır. 7. Kit içeriğindeki içeriği kullanıcı talebine göre insan, sıçan ve fare örnklerine uygun olmalıdır. 8. Universal tailing özelliğine sahip olmalı ve böylece miRNA ve mRNA ayrımına gerek kalmamalıdır. 9. Analiz için gerekli olan kolon yöntemli RNA izolasyon kiti, cDNA kiti, Sybr Green prensibine uygun master mix yeterli miktarlar paket olarak teslim edilmeli ve sonuçların doğruluğu için her biri aynı markadan temin edilmelidir. 10. Tüm assayler wet-bench valide olmalıdır ve böylece primer performansı garantilenmelidir. 11. Primerler mix, forward ve reverse aynı tüpte liyofilize halde teslim edilmelidir. 12. Teklif veren firma örneklerin toplanmasından data analizine kadar komple sistemi önerebilmelidir. 13. Teklif verilen paketteki malzemelerin hepsi aynı marka olmalı, bu şekilde gen ekspresyon sonuçları %100 garantili değerlendirilebilmelidir. 14. Pakette yer alan ürünlerin üreticisi tarafından geliştirilen bir data analiz yazılımı sayesinde sonuçlar on-line olarak değerlendirilebilmelidir. 15. Data analiz yazılımı ücretsiz ve herkezin ulaşabildiği bir internet sayfası üzerinden kullanılabilmeli, analizi ΔΔCT yöntemi ile gerçekleştirmelidir. 16. Paket içerisinde önerilen cDNA kiti ekstra sarfa ihtiyaç duyulmaksızın Dna kontaminasyonunu elimine etmelidir. 17. Ekspresyon kiti ile verilecek cDNA kiti ile öncelikle 42⁰C'de 5 dk boyunca gDNA'lar elimine edilmeli, daha sonra ikinci bir cycle ile cDNA sentezi yapılmalıdır. 18. Ekspresyon kiti ile verilecek SYBR Green Mastermix, primerler ve cDNA sentez kiti aynı ürün grubuna ait olup, üçünün birlikte kullanımıyla optimizasyon gerektirmeksizin ilk çalışmada sonuç alınacağı firma tarafından garanti edilmelidir. 19. Ekspresyon kiti ile verilecek SYBR Green Mastermix kontaminasyonu engellemek amacıyla 1.35ml'lik tüplerde verilmelidir. 20. Ekspreyon kiti ile verilcek RNA izolasyon kiti özellikleri aşağıdaki gibi olmalıdır; a) Kit ile hücre, doku ve mayalardan total RNA izolasyonu yapılabilmelidir. b) Kit ile elde edilen RNA'lar 200 bp'den büyük olmalıdır. c) Kit silika membran bazlı spin kolon prosedürü ile çalışmalıdır. d) Kit fenol ve kloroform gibi toksik ve kanserojen maddeleri içermemelidir. e) Başlangıç materyali olarak en fazla 1x107 hücre, 3 mg doku, 5x107 maya kullanılabilmelidir f) Kit prosedürü örneğin lize edilmesi, RNA'nın kolona bağlanması, yıkama ve elusyon basamaklarından oluşmalıdır. g) Kit ile elde edilen ürün miktarı lxl6 hücreden 1-35ug, 1 mg dokudan 1-6 ug, 1x107 maya hücresinden 25 mg olmalıdır. h) Kitin kullanımı sırasında başlangıç materyalinin saklandığı tüpler haricinde ekstra tüpe ihtiyaç duyulmadan prosedürün basamaklan arasındaki tüp ihtiyaçları kitin içerisinden sağlanmalıdır. i) Kit içerisinde test miktar kadar spin kolonlar ve protokolün gerektirdiği sayıda 2 ml' lik toplama tüpleri bulunmalıdır. j) Kit ile elde edilen uriinler RT-PCR, Q-RT-PCR, cDNA sentezi, northern, dot, slot blot, Poly A RNA Secimi ve mikroarray çalışmalarında kullanılabilmelidir. 21. Teklif veren firma çalışma boyunca istenildiğinde kullanıcıya aplikasyon desteği verebilmelidir. 4. RT qPCR Primer Assay Sayfa 29 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi Teknik Özellikleri: 1. Kit ile belirlenen en az 1 adet genin ekspresyon profili incelenebilmelidir. 2. Ekspresyon paketi kapsamında 100 örneklik doku stabilizasyon reaktifi, 100 örneklik doku/hücreden total RNA izolasyon kiti, 100 örneklik cDNA sentez kiti, en az 1 adet "gene of interest" +1 adet "housekeeping gene" 'in herbiri için 200'er raksiyonluk primer setleri ve toplamda 200 reaksiyonluk SYBR Green mastermix verilmelidir. 3. Paket kapsamında verilen total RNA izolasyon kiti sonraki çalışmalar için miRNA'ları da izole edebilmelidir. 4. Ekspresyon eş zamanlı olarak görüntülenebilmelidir. 5. Kit isteğa bağlı olarak ABI, Bio-Rad, Eppendorf, QIAGEN, Roche, Stratagene ve TaKaRa marka PCR cihazlarına uygun olacak formatta üretilebilmelidir. 6. Gen ekspresyonu SYBR Green temelli real time PCR protokolü ile çalışmalıdır. 7. Kit içeriğindeki içeriği kullanıcı talebine göre insan, sıçan ve fare örnklerine uygun olmalıdır. 8. Universal tailing özelliğine sahip olmalı ve böylece miRNA ve mRNA ayrımına gerek kalmamalıdır. 9. Analiz için gerekli olan kolon yöntemli RNA izolasyon kiti, cDNA kiti, Sybr Green prensibine uygun master mix yeterli miktarlar paket olarak teslim edilmeli ve sonuçların doğruluğu için her biri aynı markadan temin edilmelidir. 10. Tüm assayler wet-bench valide olmalıdır ve böylece primer performansı garantilenmelidir. 11. Primerler mix, forward ve reverse aynı tüpte liyofilize halde teslim edilmelidir. 12. Teklif veren firma örneklerin toplanmasından data analizine kadar komple sistemi önerebilmelidir. 13. Teklif verilen paketteki malzemelerin hepsi aynı marka olmalı, bu şekilde gen ekspresyon sonuçları %100 garantili değerlendirilebilmelidir. 14. Pakette yer alan ürünlerin üreticisi tarafından geliştirilen bir data analiz yazılımı sayesinde sonuçlar on-line olarak değerlendirilebilmelidir. 15. Data analiz yazılımı ücretsiz ve herkezin ulaşabildiği bir internet sayfası üzerinden kullanılabilmeli, analizi ΔΔCT yöntemi ile gerçekleştirmelidir. 16. Paket içerisinde önerilen cDNA kiti ekstra sarfa ihtiyaç duyulmaksızın Dna kontaminasyonunu elimine etmelidir. 17. Ekspresyon kiti ile verilecek cDNA kiti ile öncelikle 42⁰C'de 5 dk boyunca gDNA'lar elimine edilmeli, daha sonra ikinci bir cycle ile cDNA sentezi yapılmalıdır. 18. Ekspresyon kiti ile verilecek SYBR Green Mastermix, primerler ve cDNA sentez kiti aynı ürün grubuna ait olup, üçünün birlikte kullanımıyla optimizasyon gerektirmeksizin ilk çalışmada sonuç alınacağı firma tarafından garanti edilmelidir. 19. Ekspresyon kiti ile verilecek SYBR Green Mastermix kontaminasyonu engellemek amacıyla 1.35ml'lik tüplerde verilmelidir. 20. Ekspreyon kiti ile verilcek RNA izolasyon kiti özellikleri aşağıdaki gibi olmalıdır; a) Kit ile hücre, doku ve mayalardan total RNA izolasyonu yapılabilmelidir. b) Kit ile elde edilen RNA'lar 200 bp'den büyük olmalıdır. c) Kit silika membran bazlı spin kolon prosedürü ile çalışmalıdır. d) Kit fenol ve kloroform gibi toksik ve kanserojen maddeleri içermemelidir. e) Başlangıç materyali olarak en fazla 1x107 hücre, 3 mg doku, 5x107 maya kullanılabilmelidir f) Kit prosedürü örneğin lize edilmesi, RNA'nın kolona bağlanması, yıkama ve elusyon basamaklarından oluşmalıdır. g) Kit ile elde edilen ürün miktarı lxl6 hücreden 1-35ug, 1 mg dokudan 1-6 ug, 1x107 maya hücresinden 25 mg olmalıdır. h) Kitin kullanımı sırasında başlangıç materyalinin saklandığı tüpler haricinde ekstra tüpe ihtiyaç duyulmadan prosedürün basamaklan arasındaki tüp ihtiyaçları kitin içerisinden sağlanmalıdır. i) Kit içerisinde test miktar kadar spin kolonlar ve protokolün gerektirdiği sayıda 2 ml' lik toplama tüpleri bulunmalıdır. j) Kit ile elde edilen uriinler RT-PCR, Q-RT-PCR, cDNA sentezi, northern, dot, slot blot, Poly A RNA Secimi ve mikroarray çalışmalarında kullanılabilmelidir. 21. Teklif veren firma çalışma boyunca istenildiğinde kullanıcıya aplikasyon desteği verebilmelidir. 5. PCR master mix Sayfa 30 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi Teknik Özellikleri: 1. Kit ile belirlenen en az 1 adet genin ekspresyon profili incelenebilmelidir. 2. Ekspresyon paketi kapsamında 100 örneklik doku stabilizasyon reaktifi, 100 örneklik doku/hücreden total RNA izolasyon kiti, 100 örneklik cDNA sentez kiti, en az 1 adet "gene of interest" +1 adet "housekeeping gene" 'in herbiri için 200'er raksiyonluk primer setleri ve toplamda 200 reaksiyonluk SYBR Green mastermix verilmelidir. 3. Paket kapsamında verilen total RNA izolasyon kiti sonraki çalışmalar için miRNA'ları da izole edebilmelidir. 4. Ekspresyon eş zamanlı olarak görüntülenebilmelidir. 5. Kit isteğa bağlı olarak ABI, Bio-Rad, Eppendorf, QIAGEN, Roche, Stratagene ve TaKaRa marka PCR cihazlarına uygun olacak formatta üretilebilmelidir. 6. Gen ekspresyonu SYBR Green temelli real time PCR protokolü ile çalışmalıdır. 7. Kit içeriğindeki içeriği kullanıcı talebine göre insan, sıçan ve fare örnklerine uygun olmalıdır. 8. Universal tailing özelliğine sahip olmalı ve böylece miRNA ve mRNA ayrımına gerek kalmamalıdır. 9. Analiz için gerekli olan kolon yöntemli RNA izolasyon kiti, cDNA kiti, Sybr Green prensibine uygun master mix yeterli miktarlar paket olarak teslim edilmeli ve sonuçların doğruluğu için her biri aynı markadan temin edilmelidir. 10. Tüm assayler wet-bench valide olmalıdır ve böylece primer performansı garantilenmelidir. 11. Primerler mix, forward ve reverse aynı tüpte liyofilize halde teslim edilmelidir. 12. Teklif veren firma örneklerin toplanmasından data analizine kadar komple sistemi önerebilmelidir. 13. Teklif verilen paketteki malzemelerin hepsi aynı marka olmalı, bu şekilde gen ekspresyon sonuçları %100 garantili değerlendirilebilmelidir. 14. Pakette yer alan ürünlerin üreticisi tarafından geliştirilen bir data analiz yazılımı sayesinde sonuçlar on-line olarak değerlendirilebilmelidir. 15. Data analiz yazılımı ücretsiz ve herkezin ulaşabildiği bir internet sayfası üzerinden kullanılabilmeli, analizi ΔΔCT yöntemi ile gerçekleştirmelidir. 16. Paket içerisinde önerilen cDNA kiti ekstra sarfa ihtiyaç duyulmaksızın Dna kontaminasyonunu elimine etmelidir. 17. Ekspresyon kiti ile verilecek cDNA kiti ile öncelikle 42⁰C'de 5 dk boyunca gDNA'lar elimine edilmeli, daha sonra ikinci bir cycle ile cDNA sentezi yapılmalıdır. 18. Ekspresyon kiti ile verilecek SYBR Green Mastermix, primerler ve cDNA sentez kiti aynı ürün grubuna ait olup, üçünün birlikte kullanımıyla optimizasyon gerektirmeksizin ilk çalışmada sonuç alınacağı firma tarafından garanti edilmelidir. 19. Ekspresyon kiti ile verilecek SYBR Green Mastermix kontaminasyonu engellemek amacıyla 1.35ml'lik tüplerde verilmelidir. 20. Ekspreyon kiti ile verilcek RNA izolasyon kiti özellikleri aşağıdaki gibi olmalıdır; a) Kit ile hücre, doku ve mayalardan total RNA izolasyonu yapılabilmelidir. b) Kit ile elde edilen RNA'lar 200 bp'den büyük olmalıdır. c) Kit silika membran bazlı spin kolon prosedürü ile çalışmalıdır. d) Kit fenol ve kloroform gibi toksik ve kanserojen maddeleri içermemelidir. e) Başlangıç materyali olarak en fazla 1x107 hücre, 3 mg doku, 5x107 maya kullanılabilmelidir f) Kit prosedürü örneğin lize edilmesi, RNA'nın kolona bağlanması, yıkama ve elusyon basamaklarından oluşmalıdır. g) Kit ile elde edilen ürün miktarı lxl6 hücreden 1-35ug, 1 mg dokudan 1-6 ug, 1x107 maya hücresinden 25 mg olmalıdır. h) Kitin kullanımı sırasında başlangıç materyalinin saklandığı tüpler haricinde ekstra tüpe ihtiyaç duyulmadan prosedürün basamaklan arasındaki tüp ihtiyaçları kitin içerisinden sağlanmalıdır. i) Kit içerisinde test miktar kadar spin kolonlar ve protokolün gerektirdiği sayıda 2 ml' lik toplama tüpleri bulunmalıdır. j) Kit ile elde edilen uriinler RT-PCR, Q-RT-PCR, cDNA sentezi, northern, dot, slot blot, Poly A RNA Secimi ve mikroarray çalışmalarında kullanılabilmelidir. 21. Teklif veren firma çalışma boyunca istenildiğinde kullanıcıya aplikasyon desteği verebilmelidir. 6. Qiamp DNA mini Kit Sayfa 31 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi Teknik Özellikleri: 1. Çalışma kapsamında teklif edilecek ürünlerin tamamı çalışmanın bütünlüğü açısından aynı üretici firma tarafından sağlanmalıdır. 2. Paket teklif kapsamında kandan DNA izolasyon kiti, bisülfit kiti, kullanıcı tarafından verilen dizilere göre 20nmol metilasyon primerleri, HRM metilasyon mastermix ve metilasyon kontrolleri teklif edilmelidir. 3. Çalışmanın bütünlüğü açısından Bisülfit kit, Metilasyon Kontrolleri ve HRM mastermix aynı uretici tarafından üretilmiş olmalıdır. 4. Paket kapsamında teklif edilen kandan DNA izolasyon kiti özellikleri aşağıdaki gibi olmalıdır; a. DNA izolasyon kiti kan, doku, vücut sıvısı, idrar, sürüntü ve BOS örneklerinden genomik DNA, mitokondriyal DNA, bakteri, parazit ve viral DNA'sı izolasyonu yapabilmelidir. b. Kit silika membran bazlı spin kolon prosedürü ile çalışmalıdır. Örneğin lize edilmesi, DNA' nın kolon membranına bağlanması, membranın yıkanması, membrandan DNA' nın elüt edilmesi basamaklarından oluşan dört aşamalı bir çalışma prensibine sahip olmalıdır. c. Test prosedürü mekanik homojenizasyona ihtiyaç duymadan 20 dakika gibi kısa bir sürede tamamlanabilmelidir. d. Elusyon oranına bağlı olarak 34 ng/μl-116.8 ng/μl konsantrasyonda DNA elde edebilmelidir. e. Kit fenol ve kloroform gibi toksik ve kanserojen maddeleri içermemelidir. f. Kit 250'lik ambalajda olmalıdır. g. Kitin kullanımı sırasında başlangıç materyalinin saklandığı ve elde edilen DNA' nın alınacağı tüpler haricinde ekstra tüpe ihtiyaç duyulmadan prosedürün basamakları arasındaki tüp ihtiyaçları kitin içerisinden sağlanmalıdır. h. Kit hücrenin lize aşamasında kullanılacak olan Proteinase K' yı içermelidir. i. Kit içerisinde test miktarı kadar spin kolonlar ve protokolün gerektirdiği sayıda 2 ml lik toplama tüpleri bulunmalıdır. j. Kit içerisinde test miktarı kadar bulunan spin kolanlar tek tek steril ambalaj içerisinde olmalıdır. k. Kit 50 testlik kutu şeklinde olmalıdır. l. İzolasyon ile elde edilen DNA, PCR ve kantitatif real-time PCR uygulamalarına, southern blotting, SNP ve STR genotiplendirme uygulamalarına, farmakogenetik araştırma uygulamalarına uygun olmalıdır. 5. Paket içerisinde teklif edilencek bisülfit kiti ile bisülfitleme muamelesi yapılabilmeli ve bu sayede metile ve metile olmayan DNA ayırt edilebilmelidir. 6. Bisülfit kiti ile 1 ng kadar az DNA miktarlarında bile herhangi bir fragmentasyona neden olmadan altı saat gibi kısa bir sürede bisülfitleme işlemi gerçekleştirilebilmelidir. 7. Bisülfit içerisinde bulunan bir koruma tamponu ile mevcut DNA, fragmentasyondan korunabilmelidir. 8. Bisülfit kit iş akışı şu şekilde olmalıdır: Metile olmayan DNA'nın bisülfitlenmesi, bisülfitleme işlemi tamamlanmış tek sarmal DNA'nın spin kolona bağlanması, yıkama ve elüsyon. 9. Bisülfit kit ile elde edilen DNA PCR, Real-Time PCR, MSP-PCR,COBRA ve Pyrosequencing çalışmalarında kullanıma uygun olmalıdır. 10. Bisülfit kit içerisinde bulunan bisülfit miks 8 ayrı tüpte paylaştırılmış olmalı ve pH ayarlamasına gerek kalmayacak çalışmaya hazır optimize edilmiş olmalıdır. Başlanmadan önce bu sodium bisülfit karışımları 800ul su ile çözünmeli ve takiben -20⁰C'de 4 hafta saklanabilmelidir. 11. Paket kapsamında verilecek DNA kontrol set içerisinde 10 ng/μl konsantrasyonda bisülfilenmiş metile ve metile olmayan insan DNA'sı ile bisülfit muamelesi yapılmamış metile olmayan insan DNA'sı bulunmalıdır. 12. Her kontrol DNA EB tampon içerisinde çözünmüş halde kullanıma hazır şekilde bulunmalıdır. 13. Her bir kontrol DNA 100μl şeklinde ambalajlanmış olmalıdır. 14. Paket içerisinde teklif edilencek HRM mastermix ile kantitatif metilasyon düzeyi belirlenebilmelidir. 15. HRM metilasyon içinden kullanımı hazır, optimize mastermix ve su çıkmalıdır. 16. Mastermix içerinde Hotstarttaq plus DNA polimeraz enzimi, HRM PCR tampon ve dNTP'ler optimum düzeyde bulunmalıdır. 17. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi 94kDa'luk recombinant polimerazdan modifiye edilmiş olmalı ve Thermus aquaticus orijinli olmalıdır. 18. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi hem Hotstart olmalı hem de 5 dakikada active edilebilmelidir. 19. HRM metilasyon mastermix protokolü 3 stepli çalışmalıdır. 20. HRM mastermix ile 5 ng kadar düşük DNA'dan sonuç elde edilebilmelidir. Sayfa 32 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi 7. EpiTect Bisulfite Kit Sayfa 33 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi Teknik Özellikleri: 1. Çalışma kapsamında teklif edilecek ürünlerin tamamı çalışmanın bütünlüğü açısından aynı üretici firma tarafından sağlanmalıdır. 2. Paket teklif kapsamında kandan DNA izolasyon kiti, bisülfit kiti, kullanıcı tarafından verilen dizilere göre 20nmol metilasyon primerleri, HRM metilasyon mastermix ve metilasyon kontrolleri teklif edilmelidir. 3. Çalışmanın bütünlüğü açısından Bisülfit kit, Metilasyon Kontrolleri ve HRM mastermix aynı uretici tarafından üretilmiş olmalıdır. 4. Paket kapsamında teklif edilen kandan DNA izolasyon kiti özellikleri aşağıdaki gibi olmalıdır; a. DNA izolasyon kiti kan, doku, vücut sıvısı, idrar, sürüntü ve BOS örneklerinden genomik DNA, mitokondriyal DNA, bakteri, parazit ve viral DNA'sı izolasyonu yapabilmelidir. b. Kit silika membran bazlı spin kolon prosedürü ile çalışmalıdır. Örneğin lize edilmesi, DNA' nın kolon membranına bağlanması, membranın yıkanması, membrandan DNA' nın elüt edilmesi basamaklarından oluşan dört aşamalı bir çalışma prensibine sahip olmalıdır. c. Test prosedürü mekanik homojenizasyona ihtiyaç duymadan 20 dakika gibi kısa bir sürede tamamlanabilmelidir. d. Elusyon oranına bağlı olarak 34 ng/μl-116.8 ng/μl konsantrasyonda DNA elde edebilmelidir. e. Kit fenol ve kloroform gibi toksik ve kanserojen maddeleri içermemelidir. f. Kit 250'lik ambalajda olmalıdır. g. Kitin kullanımı sırasında başlangıç materyalinin saklandığı ve elde edilen DNA' nın alınacağı tüpler haricinde ekstra tüpe ihtiyaç duyulmadan prosedürün basamakları arasındaki tüp ihtiyaçları kitin içerisinden sağlanmalıdır. h. Kit hücrenin lize aşamasında kullanılacak olan Proteinase K' yı içermelidir. i. Kit içerisinde test miktarı kadar spin kolonlar ve protokolün gerektirdiği sayıda 2 ml lik toplama tüpleri bulunmalıdır. j. Kit içerisinde test miktarı kadar bulunan spin kolanlar tek tek steril ambalaj içerisinde olmalıdır. k. Kit 50 testlik kutu şeklinde olmalıdır. l. İzolasyon ile elde edilen DNA, PCR ve kantitatif real-time PCR uygulamalarına, southern blotting, SNP ve STR genotiplendirme uygulamalarına, farmakogenetik araştırma uygulamalarına uygun olmalıdır. 5. Paket içerisinde teklif edilencek bisülfit kiti ile bisülfitleme muamelesi yapılabilmeli ve bu sayede metile ve metile olmayan DNA ayırt edilebilmelidir. 6. Bisülfit kiti ile 1 ng kadar az DNA miktarlarında bile herhangi bir fragmentasyona neden olmadan altı saat gibi kısa bir sürede bisülfitleme işlemi gerçekleştirilebilmelidir. 7. Bisülfit içerisinde bulunan bir koruma tamponu ile mevcut DNA, fragmentasyondan korunabilmelidir. 8. Bisülfit kit iş akışı şu şekilde olmalıdır: Metile olmayan DNA'nın bisülfitlenmesi, bisülfitleme işlemi tamamlanmış tek sarmal DNA'nın spin kolona bağlanması, yıkama ve elüsyon. 9. Bisülfit kit ile elde edilen DNA PCR, Real-Time PCR, MSP-PCR,COBRA ve Pyrosequencing çalışmalarında kullanıma uygun olmalıdır. 10. Bisülfit kit içerisinde bulunan bisülfit miks 8 ayrı tüpte paylaştırılmış olmalı ve pH ayarlamasına gerek kalmayacak çalışmaya hazır optimize edilmiş olmalıdır. Başlanmadan önce bu sodium bisülfit karışımları 800ul su ile çözünmeli ve takiben -20⁰C'de 4 hafta saklanabilmelidir. 11. Paket kapsamında verilecek DNA kontrol set içerisinde 10 ng/μl konsantrasyonda bisülfilenmiş metile ve metile olmayan insan DNA'sı ile bisülfit muamelesi yapılmamış metile olmayan insan DNA'sı bulunmalıdır. 12. Her kontrol DNA EB tampon içerisinde çözünmüş halde kullanıma hazır şekilde bulunmalıdır. 13. Her bir kontrol DNA 100μl şeklinde ambalajlanmış olmalıdır. 14. Paket içerisinde teklif edilencek HRM mastermix ile kantitatif metilasyon düzeyi belirlenebilmelidir. 15. HRM metilasyon içinden kullanımı hazır, optimize mastermix ve su çıkmalıdır. 16. Mastermix içerinde Hotstarttaq plus DNA polimeraz enzimi, HRM PCR tampon ve dNTP'ler optimum düzeyde bulunmalıdır. 17. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi 94kDa'luk recombinant polimerazdan modifiye edilmiş olmalı ve Thermus aquaticus orijinli olmalıdır. 18. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi hem Hotstart olmalı hem de 5 dakikada active edilebilmelidir. 19. HRM metilasyon mastermix protokolü 3 stepli çalışmalıdır. 20. HRM mastermix ile 5 ng kadar düşük DNA'dan sonuç elde edilebilmelidir. Sayfa 34 Proje Kodu: 2014-409 Sarf MalzeSarf Malzemesi 8. METBN-0,02/Standard Primer Sayfa 35 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi Teknik Özellikleri: 1. Çalışma kapsamında teklif edilecek ürünlerin tamamı çalışmanın bütünlüğü açısından aynı üretici firma tarafından sağlanmalıdır. 2. Paket teklif kapsamında kandan DNA izolasyon kiti, bisülfit kiti, kullanıcı tarafından verilen dizilere göre 20nmol metilasyon primerleri, HRM metilasyon mastermix ve metilasyon kontrolleri teklif edilmelidir. 3. Çalışmanın bütünlüğü açısından Bisülfit kit, Metilasyon Kontrolleri ve HRM mastermix aynı uretici tarafından üretilmiş olmalıdır. 4. Paket kapsamında teklif edilen kandan DNA izolasyon kiti özellikleri aşağıdaki gibi olmalıdır; a. DNA izolasyon kiti kan, doku, vücut sıvısı, idrar, sürüntü ve BOS örneklerinden genomik DNA, mitokondriyal DNA, bakteri, parazit ve viral DNA'sı izolasyonu yapabilmelidir. b. Kit silika membran bazlı spin kolon prosedürü ile çalışmalıdır. Örneğin lize edilmesi, DNA' nın kolon membranına bağlanması, membranın yıkanması, membrandan DNA' nın elüt edilmesi basamaklarından oluşan dört aşamalı bir çalışma prensibine sahip olmalıdır. c. Test prosedürü mekanik homojenizasyona ihtiyaç duymadan 20 dakika gibi kısa bir sürede tamamlanabilmelidir. d. Elusyon oranına bağlı olarak 34 ng/μl-116.8 ng/μl konsantrasyonda DNA elde edebilmelidir. e. Kit fenol ve kloroform gibi toksik ve kanserojen maddeleri içermemelidir. f. Kit 250'lik ambalajda olmalıdır. g. Kitin kullanımı sırasında başlangıç materyalinin saklandığı ve elde edilen DNA' nın alınacağı tüpler haricinde ekstra tüpe ihtiyaç duyulmadan prosedürün basamakları arasındaki tüp ihtiyaçları kitin içerisinden sağlanmalıdır. h. Kit hücrenin lize aşamasında kullanılacak olan Proteinase K' yı içermelidir. i. Kit içerisinde test miktarı kadar spin kolonlar ve protokolün gerektirdiği sayıda 2 ml lik toplama tüpleri bulunmalıdır. j. Kit içerisinde test miktarı kadar bulunan spin kolanlar tek tek steril ambalaj içerisinde olmalıdır. k. Kit 50 testlik kutu şeklinde olmalıdır. l. İzolasyon ile elde edilen DNA, PCR ve kantitatif real-time PCR uygulamalarına, southern blotting, SNP ve STR genotiplendirme uygulamalarına, farmakogenetik araştırma uygulamalarına uygun olmalıdır. 5. Paket içerisinde teklif edilencek bisülfit kiti ile bisülfitleme muamelesi yapılabilmeli ve bu sayede metile ve metile olmayan DNA ayırt edilebilmelidir. 6. Bisülfit kiti ile 1 ng kadar az DNA miktarlarında bile herhangi bir fragmentasyona neden olmadan altı saat gibi kısa bir sürede bisülfitleme işlemi gerçekleştirilebilmelidir. 7. Bisülfit içerisinde bulunan bir koruma tamponu ile mevcut DNA, fragmentasyondan korunabilmelidir. 8. Bisülfit kit iş akışı şu şekilde olmalıdır: Metile olmayan DNA'nın bisülfitlenmesi, bisülfitleme işlemi tamamlanmış tek sarmal DNA'nın spin kolona bağlanması, yıkama ve elüsyon. 9. Bisülfit kit ile elde edilen DNA PCR, Real-Time PCR, MSP-PCR,COBRA ve Pyrosequencing çalışmalarında kullanıma uygun olmalıdır. 10. Bisülfit kit içerisinde bulunan bisülfit miks 8 ayrı tüpte paylaştırılmış olmalı ve pH ayarlamasına gerek kalmayacak çalışmaya hazır optimize edilmiş olmalıdır. Başlanmadan önce bu sodium bisülfit karışımları 800ul su ile çözünmeli ve takiben -20⁰C'de 4 hafta saklanabilmelidir. 11. Paket kapsamında verilecek DNA kontrol set içerisinde 10 ng/μl konsantrasyonda bisülfilenmiş metile ve metile olmayan insan DNA'sı ile bisülfit muamelesi yapılmamış metile olmayan insan DNA'sı bulunmalıdır. 12. Her kontrol DNA EB tampon içerisinde çözünmüş halde kullanıma hazır şekilde bulunmalıdır. 13. Her bir kontrol DNA 100μl şeklinde ambalajlanmış olmalıdır. 14. Paket içerisinde teklif edilencek HRM mastermix ile kantitatif metilasyon düzeyi belirlenebilmelidir. 15. HRM metilasyon içinden kullanımı hazır, optimize mastermix ve su çıkmalıdır. 16. Mastermix içerinde Hotstarttaq plus DNA polimeraz enzimi, HRM PCR tampon ve dNTP'ler optimum düzeyde bulunmalıdır. 17. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi 94kDa'luk recombinant polimerazdan modifiye edilmiş olmalı ve Thermus aquaticus orijinli olmalıdır. 18. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi hem Hotstart olmalı hem de 5 dakikada active edilebilmelidir. 19. HRM metilasyon mastermix protokolü 3 stepli çalışmalıdır. 20. HRM mastermix ile 5 ng kadar düşük DNA'dan sonuç elde edilebilmelidir. Sayfa 36 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi 9. EpiTect HRM PCR Kit Sayfa 37 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi Teknik Özellikleri: 1. Çalışma kapsamında teklif edilecek ürünlerin tamamı çalışmanın bütünlüğü açısından aynı üretici firma tarafından sağlanmalıdır. 2. Paket teklif kapsamında kandan DNA izolasyon kiti, bisülfit kiti, kullanıcı tarafından verilen dizilere göre 20nmol metilasyon primerleri, HRM metilasyon mastermix ve metilasyon kontrolleri teklif edilmelidir. 3. Çalışmanın bütünlüğü açısından Bisülfit kit, Metilasyon Kontrolleri ve HRM mastermix aynı uretici tarafından üretilmiş olmalıdır. 4. Paket kapsamında teklif edilen kandan DNA izolasyon kiti özellikleri aşağıdaki gibi olmalıdır; a. DNA izolasyon kiti kan, doku, vücut sıvısı, idrar, sürüntü ve BOS örneklerinden genomik DNA, mitokondriyal DNA, bakteri, parazit ve viral DNA'sı izolasyonu yapabilmelidir. b. Kit silika membran bazlı spin kolon prosedürü ile çalışmalıdır. Örneğin lize edilmesi, DNA' nın kolon membranına bağlanması, membranın yıkanması, membrandan DNA' nın elüt edilmesi basamaklarından oluşan dört aşamalı bir çalışma prensibine sahip olmalıdır. c. Test prosedürü mekanik homojenizasyona ihtiyaç duymadan 20 dakika gibi kısa bir sürede tamamlanabilmelidir. d. Elusyon oranına bağlı olarak 34 ng/μl-116.8 ng/μl konsantrasyonda DNA elde edebilmelidir. e. Kit fenol ve kloroform gibi toksik ve kanserojen maddeleri içermemelidir. f. Kit 250'lik ambalajda olmalıdır. g. Kitin kullanımı sırasında başlangıç materyalinin saklandığı ve elde edilen DNA' nın alınacağı tüpler haricinde ekstra tüpe ihtiyaç duyulmadan prosedürün basamakları arasındaki tüp ihtiyaçları kitin içerisinden sağlanmalıdır. h. Kit hücrenin lize aşamasında kullanılacak olan Proteinase K' yı içermelidir. i. Kit içerisinde test miktarı kadar spin kolonlar ve protokolün gerektirdiği sayıda 2 ml lik toplama tüpleri bulunmalıdır. j. Kit içerisinde test miktarı kadar bulunan spin kolanlar tek tek steril ambalaj içerisinde olmalıdır. k. Kit 50 testlik kutu şeklinde olmalıdır. l. İzolasyon ile elde edilen DNA, PCR ve kantitatif real-time PCR uygulamalarına, southern blotting, SNP ve STR genotiplendirme uygulamalarına, farmakogenetik araştırma uygulamalarına uygun olmalıdır. 5. Paket içerisinde teklif edilencek bisülfit kiti ile bisülfitleme muamelesi yapılabilmeli ve bu sayede metile ve metile olmayan DNA ayırt edilebilmelidir. 6. Bisülfit kiti ile 1 ng kadar az DNA miktarlarında bile herhangi bir fragmentasyona neden olmadan altı saat gibi kısa bir sürede bisülfitleme işlemi gerçekleştirilebilmelidir. 7. Bisülfit içerisinde bulunan bir koruma tamponu ile mevcut DNA, fragmentasyondan korunabilmelidir. 8. Bisülfit kit iş akışı şu şekilde olmalıdır: Metile olmayan DNA'nın bisülfitlenmesi, bisülfitleme işlemi tamamlanmış tek sarmal DNA'nın spin kolona bağlanması, yıkama ve elüsyon. 9. Bisülfit kit ile elde edilen DNA PCR, Real-Time PCR, MSP-PCR,COBRA ve Pyrosequencing çalışmalarında kullanıma uygun olmalıdır. 10. Bisülfit kit içerisinde bulunan bisülfit miks 8 ayrı tüpte paylaştırılmış olmalı ve pH ayarlamasına gerek kalmayacak çalışmaya hazır optimize edilmiş olmalıdır. Başlanmadan önce bu sodium bisülfit karışımları 800ul su ile çözünmeli ve takiben -20⁰C'de 4 hafta saklanabilmelidir. 11. Paket kapsamında verilecek DNA kontrol set içerisinde 10 ng/μl konsantrasyonda bisülfilenmiş metile ve metile olmayan insan DNA'sı ile bisülfit muamelesi yapılmamış metile olmayan insan DNA'sı bulunmalıdır. 12. Her kontrol DNA EB tampon içerisinde çözünmüş halde kullanıma hazır şekilde bulunmalıdır. 13. Her bir kontrol DNA 100μl şeklinde ambalajlanmış olmalıdır. 14. Paket içerisinde teklif edilencek HRM mastermix ile kantitatif metilasyon düzeyi belirlenebilmelidir. 15. HRM metilasyon içinden kullanımı hazır, optimize mastermix ve su çıkmalıdır. 16. Mastermix içerinde Hotstarttaq plus DNA polimeraz enzimi, HRM PCR tampon ve dNTP'ler optimum düzeyde bulunmalıdır. 17. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi 94kDa'luk recombinant polimerazdan modifiye edilmiş olmalı ve Thermus aquaticus orijinli olmalıdır. 18. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi hem Hotstart olmalı hem de 5 dakikada active edilebilmelidir. 19. HRM metilasyon mastermix protokolü 3 stepli çalışmalıdır. 20. HRM mastermix ile 5 ng kadar düşük DNA'dan sonuç elde edilebilmelidir. Sayfa 38 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi 10. EpiTect Control DNA, unmethylated Sayfa 39 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi Teknik Özellikleri: 1. Çalışma kapsamında teklif edilecek ürünlerin tamamı çalışmanın bütünlüğü açısından aynı üretici firma tarafından sağlanmalıdır. 2. Paket teklif kapsamında kandan DNA izolasyon kiti, bisülfit kiti, kullanıcı tarafından verilen dizilere göre 20nmol metilasyon primerleri, HRM metilasyon mastermix ve metilasyon kontrolleri teklif edilmelidir. 3. Çalışmanın bütünlüğü açısından Bisülfit kit, Metilasyon Kontrolleri ve HRM mastermix aynı uretici tarafından üretilmiş olmalıdır. 4. Paket kapsamında teklif edilen kandan DNA izolasyon kiti özellikleri aşağıdaki gibi olmalıdır; a. DNA izolasyon kiti kan, doku, vücut sıvısı, idrar, sürüntü ve BOS örneklerinden genomik DNA, mitokondriyal DNA, bakteri, parazit ve viral DNA'sı izolasyonu yapabilmelidir. b. Kit silika membran bazlı spin kolon prosedürü ile çalışmalıdır. Örneğin lize edilmesi, DNA' nın kolon membranına bağlanması, membranın yıkanması, membrandan DNA' nın elüt edilmesi basamaklarından oluşan dört aşamalı bir çalışma prensibine sahip olmalıdır. c. Test prosedürü mekanik homojenizasyona ihtiyaç duymadan 20 dakika gibi kısa bir sürede tamamlanabilmelidir. d. Elusyon oranına bağlı olarak 34 ng/μl-116.8 ng/μl konsantrasyonda DNA elde edebilmelidir. e. Kit fenol ve kloroform gibi toksik ve kanserojen maddeleri içermemelidir. f. Kit 250'lik ambalajda olmalıdır. g. Kitin kullanımı sırasında başlangıç materyalinin saklandığı ve elde edilen DNA' nın alınacağı tüpler haricinde ekstra tüpe ihtiyaç duyulmadan prosedürün basamakları arasındaki tüp ihtiyaçları kitin içerisinden sağlanmalıdır. h. Kit hücrenin lize aşamasında kullanılacak olan Proteinase K' yı içermelidir. i. Kit içerisinde test miktarı kadar spin kolonlar ve protokolün gerektirdiği sayıda 2 ml lik toplama tüpleri bulunmalıdır. j. Kit içerisinde test miktarı kadar bulunan spin kolanlar tek tek steril ambalaj içerisinde olmalıdır. k. Kit 50 testlik kutu şeklinde olmalıdır. l. İzolasyon ile elde edilen DNA, PCR ve kantitatif real-time PCR uygulamalarına, southern blotting, SNP ve STR genotiplendirme uygulamalarına, farmakogenetik araştırma uygulamalarına uygun olmalıdır. 5. Paket içerisinde teklif edilencek bisülfit kiti ile bisülfitleme muamelesi yapılabilmeli ve bu sayede metile ve metile olmayan DNA ayırt edilebilmelidir. 6. Bisülfit kiti ile 1 ng kadar az DNA miktarlarında bile herhangi bir fragmentasyona neden olmadan altı saat gibi kısa bir sürede bisülfitleme işlemi gerçekleştirilebilmelidir. 7. Bisülfit içerisinde bulunan bir koruma tamponu ile mevcut DNA, fragmentasyondan korunabilmelidir. 8. Bisülfit kit iş akışı şu şekilde olmalıdır: Metile olmayan DNA'nın bisülfitlenmesi, bisülfitleme işlemi tamamlanmış tek sarmal DNA'nın spin kolona bağlanması, yıkama ve elüsyon. 9. Bisülfit kit ile elde edilen DNA PCR, Real-Time PCR, MSP-PCR,COBRA ve Pyrosequencing çalışmalarında kullanıma uygun olmalıdır. 10. Bisülfit kit içerisinde bulunan bisülfit miks 8 ayrı tüpte paylaştırılmış olmalı ve pH ayarlamasına gerek kalmayacak çalışmaya hazır optimize edilmiş olmalıdır. Başlanmadan önce bu sodium bisülfit karışımları 800ul su ile çözünmeli ve takiben -20⁰C'de 4 hafta saklanabilmelidir. 11. Paket kapsamında verilecek DNA kontrol set içerisinde 10 ng/μl konsantrasyonda bisülfilenmiş metile ve metile olmayan insan DNA'sı ile bisülfit muamelesi yapılmamış metile olmayan insan DNA'sı bulunmalıdır. 12. Her kontrol DNA EB tampon içerisinde çözünmüş halde kullanıma hazır şekilde bulunmalıdır. 13. Her bir kontrol DNA 100μl şeklinde ambalajlanmış olmalıdır. 14. Paket içerisinde teklif edilencek HRM mastermix ile kantitatif metilasyon düzeyi belirlenebilmelidir. 15. HRM metilasyon içinden kullanımı hazır, optimize mastermix ve su çıkmalıdır. 16. Mastermix içerinde Hotstarttaq plus DNA polimeraz enzimi, HRM PCR tampon ve dNTP'ler optimum düzeyde bulunmalıdır. 17. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi 94kDa'luk recombinant polimerazdan modifiye edilmiş olmalı ve Thermus aquaticus orijinli olmalıdır. 18. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi hem Hotstart olmalı hem de 5 dakikada active edilebilmelidir. 19. HRM metilasyon mastermix protokolü 3 stepli çalışmalıdır. 20. HRM mastermix ile 5 ng kadar düşük DNA'dan sonuç elde edilebilmelidir. Sayfa 40 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi 11. EpiTect Control DNA, methylated Sayfa 41 Proje Kodu: 2014-409 Sarf Malzemesi Teknik Özellikleri: 1. Çalışma kapsamında teklif edilecek ürünlerin tamamı çalışmanın bütünlüğü açısından aynı üretici firma tarafından sağlanmalıdır. 2. Paket teklif kapsamında kandan DNA izolasyon kiti, bisülfit kiti, kullanıcı tarafından verilen dizilere göre 20nmol metilasyon primerleri, HRM metilasyon mastermix ve metilasyon kontrolleri teklif edilmelidir. 3. Çalışmanın bütünlüğü açısından Bisülfit kit, Metilasyon Kontrolleri ve HRM mastermix aynı uretici tarafından üretilmiş olmalıdır. 4. Paket kapsamında teklif edilen kandan DNA izolasyon kiti özellikleri aşağıdaki gibi olmalıdır; a. DNA izolasyon kiti kan, doku, vücut sıvısı, idrar, sürüntü ve BOS örneklerinden genomik DNA, mitokondriyal DNA, bakteri, parazit ve viral DNA'sı izolasyonu yapabilmelidir. b. Kit silika membran bazlı spin kolon prosedürü ile çalışmalıdır. Örneğin lize edilmesi, DNA' nın kolon membranına bağlanması, membranın yıkanması, membrandan DNA' nın elüt edilmesi basamaklarından oluşan dört aşamalı bir çalışma prensibine sahip olmalıdır. c. Test prosedürü mekanik homojenizasyona ihtiyaç duymadan 20 dakika gibi kısa bir sürede tamamlanabilmelidir. d. Elusyon oranına bağlı olarak 34 ng/μl-116.8 ng/μl konsantrasyonda DNA elde edebilmelidir. e. Kit fenol ve kloroform gibi toksik ve kanserojen maddeleri içermemelidir. f. Kit 250'lik ambalajda olmalıdır. g. Kitin kullanımı sırasında başlangıç materyalinin saklandığı ve elde edilen DNA' nın alınacağı tüpler haricinde ekstra tüpe ihtiyaç duyulmadan prosedürün basamakları arasındaki tüp ihtiyaçları kitin içerisinden sağlanmalıdır. h. Kit hücrenin lize aşamasında kullanılacak olan Proteinase K' yı içermelidir. i. Kit içerisinde test miktarı kadar spin kolonlar ve protokolün gerektirdiği sayıda 2 ml lik toplama tüpleri bulunmalıdır. j. Kit içerisinde test miktarı kadar bulunan spin kolanlar tek tek steril ambalaj içerisinde olmalıdır. k. Kit 50 testlik kutu şeklinde olmalıdır. l. İzolasyon ile elde edilen DNA, PCR ve kantitatif real-time PCR uygulamalarına, southern blotting, SNP ve STR genotiplendirme uygulamalarına, farmakogenetik araştırma uygulamalarına uygun olmalıdır. 5. Paket içerisinde teklif edilencek bisülfit kiti ile bisülfitleme muamelesi yapılabilmeli ve bu sayede metile ve metile olmayan DNA ayırt edilebilmelidir. 6. Bisülfit kiti ile 1 ng kadar az DNA miktarlarında bile herhangi bir fragmentasyona neden olmadan altı saat gibi kısa bir sürede bisülfitleme işlemi gerçekleştirilebilmelidir. 7. Bisülfit içerisinde bulunan bir koruma tamponu ile mevcut DNA, fragmentasyondan korunabilmelidir. 8. Bisülfit kit iş akışı şu şekilde olmalıdır: Metile olmayan DNA'nın bisülfitlenmesi, bisülfitleme işlemi tamamlanmış tek sarmal DNA'nın spin kolona bağlanması, yıkama ve elüsyon. 9. Bisülfit kit ile elde edilen DNA PCR, Real-Time PCR, MSP-PCR,COBRA ve Pyrosequencing çalışmalarında kullanıma uygun olmalıdır. 10. Bisülfit kit içerisinde bulunan bisülfit miks 8 ayrı tüpte paylaştırılmış olmalı ve pH ayarlamasına gerek kalmayacak çalışmaya hazır optimize edilmiş olmalıdır. Başlanmadan önce bu sodium bisülfit karışımları 800ul su ile çözünmeli ve takiben -20⁰C'de 4 hafta saklanabilmelidir. 11. Paket kapsamında verilecek DNA kontrol set içerisinde 10 ng/μl konsantrasyonda bisülfilenmiş metile ve metile olmayan insan DNA'sı ile bisülfit muamelesi yapılmamış metile olmayan insan DNA'sı bulunmalıdır. 12. Her kontrol DNA EB tampon içerisinde çözünmüş halde kullanıma hazır şekilde bulunmalıdır. 13. Her bir kontrol DNA 100μl şeklinde ambalajlanmış olmalıdır. 14. Paket içerisinde teklif edilencek HRM mastermix ile kantitatif metilasyon düzeyi belirlenebilmelidir. 15. HRM metilasyon içinden kullanımı hazır, optimize mastermix ve su çıkmalıdır. 16. Mastermix içerinde Hotstarttaq plus DNA polimeraz enzimi, HRM PCR tampon ve dNTP'ler optimum düzeyde bulunmalıdır. 17. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi 94kDa'luk recombinant polimerazdan modifiye edilmiş olmalı ve Thermus aquaticus orijinli olmalıdır. 18. Mastermix içerisindeki Taq polimeraz enzimi hem Hotstart olmalı hem de 5 dakikada active edilebilmelidir. 19. HRM metilasyon mastermix protokolü 3 stepli çalışmalıdır. 20. HRM mastermix ile 5 ng kadar düşük DNA'dan sonuç elde edilebilmelidir.