http://mesutsahin.org 1/4 http://mesutsahin.org Venöz Kan Alımı Kanı alınacak kişinin kendisini rahat hissedeceği bir pozisyona gelmesi sağlanır. Kan alacak kişinin tek kullanımlık lateks eldiven giymesi çok önemlidir. Kanın alınacağı tüpler, turnike, iğne, holder(vacutainer) ve %70’lik alkolle ıslatılmış pamuk hazırlanır. Dirseğin 1015 santimetre yukarısına turkine bağlanır ve dirsek içindeki d amarlardan biri seçilir, seçilen damarın üzeri %70 alkolle ıslatılmış pamukla içten dışa ve aşağıdan yukarı doğru dairesel hareketlerle silinip kuruması beklenir. Holder’a takılan iğnenin steril ucu açılır. Kesik u ç yukarı bakacak şekilde dar açıyla damara girilir ve 1 santimetre kadar damarda ilerletilir. Bir elle holder tutulurken diğer elle de tüpler takılır, gerekirse değiştirilir. Damara g irildikten hemen sonra t urnike açılabilir fakat kan alma işlemi bittikten sonra iğne damardan çıkarılmadan önce mutlaka açılmalıdır aksi takdirde venden kan akabilir. İğnenin çıkarıldığı yere kuru bir pamukla 5 dakika kadar bastırılır. Bu esnada kolun kıvrılması veya iğne yerinin ovalanması hem kanın durma süresini uzatabilir hem de bölgesel morarmaya yol açabilir. Kapiller Kan Alımı Kapiller kan alımı genellikle parmak ucundan gerçekleştirilir. Kullanılmayan elin orta veya yüzük parmağı (genellikle yüzük parmağı) %70’lik alkolle ıslatılmış pamuk ile s ilinip kuruması beklenir. Parmağın iç kısmından tırnaktan yaklaşık 1 s antimetre uzaktan tek kullanımlık s teril lansetle 3 -4 mm kadar delinir. İlk gelen kan damlası kuru bi r pa mukla silinip atılır, sonraki damlalar analizler için kullanılabilir. Kanama Zamanı Tayini Duke yönteminde kapiller kan alımı başlığında anlatıldığı gibi parmak ucu delinip ilk damla s ilindikten s onra, temiz bir kurutma kağıdı her 30 s aniyede b ir de linen böl geye değdirilir. Kağıda kanın bulaşmadığı süre kanama zamanı olarak kaydedilir. Kan veren kişinin hareketsiz durması ve parmağa baskı uygulanmaması gerekir. Pıhtılaşma Zamanı Tayini Lam yönteminde, uygun biçimde alınan kapiller kandan iki damla temizlenmiş bir lam üzerine alınır. Damlalardan biri her 30 saniyede bir kan alınan lansetle kontrol edilerek fibrin iplikçiği oluşup oluşmadığına bakılır. İlk damlada fibrin gözlemlendikten sonra ikinci damlaya g eçilir (ilk damla 30 saniyede bir karıştırıldığı için daha erken pıhtılaşır) ve o damladaki fibrin oluşumu her 30 saniyede bir kontrol edilir. İkinci damlada fibrin oluşumunun görüldüğü süre pıhtılaşma zamanı olarak kaydedilir. Hipertonik(Çok Yoğun), İzotonik(Eş yoğun) ve Hipotonik (Az Yoğun) Çözeltilerin Alyuvar Morfolojisine Etkisi Hücreler seçici geçirgen zar yapısına sahip oldukları için iç ortamlarından daha yoğun bir ortama konduklarında yapılarından su kaybederek büzüşür, az yoğun ortama konduklarında ise su alarak şişerler. Hayvan hücrelerinde bu şişme bir noktadan sonra hücrelerin patlamasına yol açar(sitoliz). Bu deneyde lam üzerine damlatılmış %10luk(hipertonik), %0,9luk(izotonik) NaCl çözeltileri ve saf su(hipotonik) içine pıhtılaşması önlenmiş kan eklenerek mikroskop http://mesutsahin.org 1/4 http://mesutsahin.org http://mesutsahin.org 2/4 http://mesutsahin.org altında alyuvarların morfolojilerine bakılır. Hipertonik ortamda alyuvarların büzüştüğü, hipotonik ortamda şişerek patladıkları, izotonik ortamda ise tipik tavla pulu görünümlerini korudukları gözlenir Santrifüj Edilen Pıhtılaşması Engellenmiş Periferik Tam Kandaki Yapıların Yaklaşık Yüzdeleri Lökositlerin Genel Şekillleri http://mesutsahin.org 2/4 http://mesutsahin.org http://mesutsahin.org HÜCRE TİPİ Eritrosit Lökosit 3/4 http://mesutsahin.org KAN HÜCRELERİNİN ÜRÜN VE GÖREVLERİ TEMEL ÜRÜN TEMEL GÖREV Hemoglobin O2 ve CO2 Taşınması Spesifik granüller ve modifiye lizozomlar (azürofilik granüller) Bakteri Fagozitozu Spesifik granüller ve farmakolojik aktif bileşenler Oparazitik Helmintlere karşı savunma ve inflamasyon düzenlenmesi Bazofil Histamin ve heparin içeren spesifik granüller Histamin ve diğer inflamasyon düzenleyicilerinin salınması Lenfosit (B, T, NK) Immunoglobulinler, hücre öldüren ve diğer lökositlerin aktivitesini düzenleyen yapılar Virüsle enfekte hücrelerin veya tümör hücrelerinin öldürülmesi, antikor üretimi Nötrofil Eozinofil (Asidofil) Monosit Lizozomal enzimler içeren granüller Kan Pulcuğu Pıhtılaşma faktörleri Doku fagositlerine dönüşerek parazitik protozoonların, virüsle enfekte hücrelerin ve yaşlı hücrelerin öldürülmesi Pıhtılaşma ve yara oluşumu Alyuvar Osmotik Direncinin Belirlenmesi Alyuvarlar düşük yoğunlukta tuz çözeltilerine konulduğunda şişerek patlarlar(deplazmoliz, sitoliz) ve alyuvar içeriği dışarı çıkar(hemoliz). Geriye kalan alyuvar zarına ‘alyuvar hayaleti’ denir. Bu yöntemde 10 adet deney tüpüne %1’den başlayıp, %0,1’lik oranlarla az alan yoğunlukta (%1; %0,9; %0,8 …) NaCl çözeltisi konulur ve bu deney tüplerine 1-2 damla hasta kanı damlatılır. Tüpler 1-2 defa ters çevrilerek kanın çözelti içinde dağılması sağlanır. 10 dakika kadar beklendikten sonra alyuvarların parçalanıp parçalanmadıkları tüplerin arkasında tutulan bir kitaptaki yazıların okunup okunmamasına, yüksek konsantrasyondan düşük konsantrasyona doğru bakılarak kontrol edilir. Yazıların ilk defa okunmaya başladıkları konsantrasyon minimal osmotik direnç, net olarak okundukları konsantrasyon ise maksimal osmotik direnç noktası olarak işaretlenir. Dolaşımdaki alyuvarların şekli ve içerikleri ile ilgili fikir veren, klinikte önemli bir yöntemdir. Kan Hücrelerinin Boyanması Kan hücreleri genellikle bir damla kanın lam üzerine ince bir tabaka oluşturacak şekilde yayılmasıyla elde edilen yaymalarla çalışılır. Kan lam üzerinde homojen bir tabaka oluşturacak şekilde yayılmalı ve hızla havada kuruması sağlanmalıdır. Bu şekilde hazırlanmış yayma preparatlarda kan hücreleri kolayca tanınıp birbirinden ayırt edilebilir. Böylece sitoplazmaları yayılarak çekirdeğin ve sitoplazmik organizasyonlarının görüntülenmesini kolaylaştırır. Kan yaymaları rutin olarak kırmızı(asidik) ve mavi(bazik) boyaların özel karışımlarıyla boyanır. Bu karışımlar ayrıca azürofilik olarak bilinen bazı kan yapılarının http://mesutsahin.org 3/4 http://mesutsahin.org http://mesutsahin.org 4/4 http://mesutsahin.org boyanmalarında kullanışlı azür(açık mavi) bileşenler de içerir. Bu özel karışımların çoğu orjinal karışımdan kendi modifikasyonlarını yapmış araştırıcıların adlarıyla anılır(Giemsa, Wright, L eisshman g ibi). Giemsa boyamadan önce kısa süreli bir kimyasal fiksasyon (metanol) basamağı vardır. Boyanın uygulama süresi yaklaşık 30 dakikadır. KAN YAPILARININ SAYI VE YÜZDELERİ (Kan Sayımı) µL'DEKİ YAKLAŞIK YAPI TİPİ YAKLAŞIK YÜZDE SAYI Kadın: 3,9-5,5 X 106 Eritrosit Erkek: 4,1-6 X 106 Toplam eritrosit sayısının yaklaşık %1'i Retikülosit 6000-10.000 Lökosit Nötrofil 5.000 %60-70 Eozinofil 150 %2-4 Bazofil 30 %0,5 Lenfosit 2.400 %28 Monosit 350 %5 Kan 300.000 Pulcuğu Formül Lökosit (Lökosit Formülü, Froti) ETİKET Yayma kan preparatlarında, lökositlerin tiplerine göre ayrılmasıyla elde edilen yüzdelerdir. Klinik öne me s ahiptir, her ne kadar günümüzde otomatik makineler tarafından yapılabiliyor olsa da hala manuel yapılmasına ihtiyaç duyulduğu durumlar ortaya çıkabilmektedir. İmmersiyon objektifi ile farklı sahalardan toplam 100 veya 100’ün katı lökosit sayılır ve tiplerine göre ayrılarak yüzde oranlar elde edilir. Kullanımdan sonra immersiyon objektifi alkol-eter (1:1) karışımıyla silinir. Lamda lökosit formülü (Froti) belirlenirken saha seçiminde izlenecek yol. http://mesutsahin.org 4/4 http://mesutsahin.org