1128_Dağıstan Genetik.indd

Türk Psikiyatri Dergisi 2012;23(3):161-70
Dağıstan Genetik İzolatlarında Erken Başlangıçlı
Majör Depresif Bozukluk ile İlişkili Gen Haritalaması
•
Dr. Kazima BULAYEVA1, Dr. Todd LENCZ2, Dr. Stephen GLATT3, Dr. Toru TAKUMI4,
Dr. Farida GURGENOVA5, Dr. Hideshi KAWAKAMI6, Dr. Oleg BULAYEV7
ÖZET
Amaç: Bu çalışmanın amacı Kafkas Dağıstan yerli etnik toplumlarının genetik izolatlarında erken başlangıçlı major depresif bozukluğun
(MDB) moleküler epidemiyolojisini incelemektir.
Yöntem: Uzun dönemli Dağıstan Genetik Kalıtım Araştırma Programımız içinde iki ayrı dağlık izolattan, erken başlangıçlı MDB’nin olduğu iki çok kuşaklı soyağacı belirlendi. İlk izolatta 11’inde intihar girişimi olan 48 MDB (19’u hayatta), ikinci izolatta 12’sinde intihar girişimi olan 60 MDB (30’u hayatta) olgusu vardı. Bölgesel psikiyatri hastanesindeki veriler ve DSM-IV tanı ölçütlerini temel alan DIGS (Diagnostic Interview for Genetic Studies/Genetik Çalışmalar için Tanısal Değerlendirme) yazılımının Rusça çevirisini kullanarak yaptığımız
klinik değerlendirmelerimizi içeren veritabanını kullanarak, etkilenmiş
aile bireylerinin fenotipleri belirlendi. Soyağaçlarının etkilenmiş ve etkilenmemiş 64 üyesinin 10cM genomik taraması (Weber/CHLC 9.0
STRs) yapıldı ve veri çok noktalı (multipoint) parametrik bağlantı analizinde kullanıldı. Bu taramadan sonra seçilmiş olgular, gen kopya sayısının (copy number variations/CNV) MDB’nin genetik temeline katkısını saptayabilmek için Affymetrix 6.0 SNP sıralanışı ile analiz edildi.
Bulgular: İki izolatta MDB’ye nominal (LOD>1.3) bağlantılı 18 genomik bölge saptadık. Anlamlı (LOD>3) tüm genom bağlantıları olan 3 genomik bölge belirlendi: 2p13.2-p11.2, 14q31.12-q32.13
ve 22q12.3. Ayrıca MDB için daha önce 4q25, 11p15, 12q23-24,
13q31-32, 18q21-22 ve 22q11-13’de elde edilen bulguları da doğrulamış olduk. Her iki genetik izolatta 6 bağlantı bölgesi belirlenirken, diğer 12 bağlantı topluma özgü heterojenite gösterdi. 18 bağlantı bölgesinden 12’sinde CNV’lerde yeniden düzenlenmeler vardı. Etkilenmiş
bireylerde genomik dengesizliğin en yüksek oranda görüldüğü bağlantı
bölgeleri 2p13.2-p11.2, 4q25-q28.2, 7p14.1, 8p23, 14q31.12-q32.13,
18q22.1 ve 20p13olarak saptandı.
Sonuç: Bu çalışmada elde edilen sonuçlar genetik olarak homojen izolatlarda MDB’yi de içeren karmaşık hastalıkların gen haritalamasının,
bağlantı sinyallerini saptamaya yardım ettiği ve bağlantı bölgelerinde yapısal genomik çeşitlilikleri saptayan yöntemlerle birleştirildiğinde yatkınlık genlerinin araştırılmasını kolaylaştırdığını ileri sürmektedir.
Anahtar Sözcükler: Major depresif bozukluk, intihar, genetik bağlantı
analizi, SNPler, DNA gen kopyası sayısı
SUMMARY
Mapping Genes Related to Early Onset Major Depressive Disorder
in Dagestan Genetic Isolates
Aim: The purpose of this study was to determine the molecular epidemiology of early onset major depressive disorder (MDD) in genetic isolates of the Caucasus Dagestan indigenous ethnic populations using molecular and statistical population-genetic approaches.
Methods: Two multigenerational pedigrees from two diverse remote
highland isolates with aggregation of early onset MDD were ascertained
within our long-term research program titled ‘Dagestan Genetic Heritage, DGH’. The first isolate included 48 cases of MDD (19 living) with
11 suicides committed, and the second included 60 MDD cases (30 living) with 12 suicides committed. The phenotypes of the affected family members were determined using a database containing diagnoses
from a regional psychiatric hospital and through our own clinical examinations, which were based on a Russian translation of DIGS software
based on the DSM-IV criteria . A 10 cM genomic scan (Weber/CHLC
9.0 STRs) of the 64 affected and non-affected members of the pedigrees
was performed and the data was used for multipoint parametric linkage
analyses. Following this scan, selected cases were analyzed by Affymetrix
6.0 SNP arrays in order to refine the contribution of copy number variations (CNVs) to the genetic basis of MDD.
Results: We found a total of 18 genomic regions with nominal
(LOD>1.3) linkage to MDD across the two isolates. Three genomic
regions had genome-wide significant (LOD>3) linkages and were found at 2p13.2-p11.2, 14q31.12-q32.13 and 22q12.3. We also confirmed previous findings for MDD at 4q25, 11p15, 12q23-24, 13q31-32,
18q21-22 and 22q11-13. Six linkage regions were observed in both genetic isolates, while 12 other linkages demonstrated population-specific
heterogeneity. We detected CNV rearrangements within 12 of the 18
linkage regions. Affected subjects had the highest rate of genomic instability within the linkage regions at 2p13.2-p11.2, 4q25-q28.2, 7p14.1,
8p23, 14q31.12-q32.13, 18q22.1 and 20p13.
Conclusion: The results obtained in this study suggest that mapping
genes of complex diseases, including MDD, across genetically homogeneous isolates can help detect linkage signals and expedite the search for
susceptibility genes when combined with methods that detect structural
genomic variation in linkage regions.
Key Words: Major depressive disorder, suicide, genetic linkage analysis,
SNPs, DNA copy number variants
Geliş Tarihi: 25.02.2011 - Kabul Tarihi: 08.07.2011
1
Prof., 5MSc., Araş. Gör., 7PhD, Kıdemli bilim adamı, Rusya Bilimler Akademisi, NI Vavilov Genetik Enstitüsü, Moskova, Rusya. 2Prof., Zucker Hillside Hastanesi,
Psikiyatri Araştırmaları Birimi, 3Prof., SUNY Upstate Tıp Fakültesi Psikiyatri ve Davranış Bilimleri Bölümü ve Tıbbi Genetik Araştırma Merkezi, New York, USA.
4
Prof., Biyomedikal Bilimler Bioscience Yüksek Lisans Okulu, 6Prof., Hiroşima Üniversitesi Radyasyon Biyolojisi ve Tıp Araştırma Enstitüsü, Hiroşima, Japonya.
Dr. Kazima Bulayeva, e-posta: bulaeva@vigg.ru
161
GİRİŞ
Major depresif bozukluk (MDB) sürekli üzgünlük, aşırı yorgunluk, suçluluk ve umutsuzluk düşünceleri, iştah değişiklikleri, uykusuzluk ve intihar düşünceleri ile belirlenen karmaşık bir psikiyatrik bozukluktur (DSM-IV). İntihar olgularında major depresyon riski kontrollere göre 11 kat daha fazladır
(Kim ve ark. 2007). MDB’de kalıtılabilirlik diğer psikiyatrik
bozukluklarda görülenden daha düşük olmakla birlikte, ikiz
çalışmaları genetik katkının yaklaşık %35-40 düzeyinde olduğunu göstermiştir (Glowinski ve ark. 2003, Sullivan ve ark.
2000). Ek olarak, major depresyonu olan kişilerin birinci derece yakınlarında MDB görülme olasılığı (yaklaşık %15-20),
major depresyonu olmayan kontrollerin birinci derece yakınlarına göre (yaklaşık %5) daha yüksektir. Diğer ruhsal bozukluklarda olduğu gibi genetik geçiş şekli karmaşık ve tam anlaşılamamış olup bugüne kadar hiçbir yatkınlık geni kesin olarak belirlenememiştir (Kato 2007). Tüm genom bağlantı çalışmalarında 1q21-42, 4p16, 10q21-26, 11p15, 12q23-24,
13q11-32, 15q25-q26, 18p11, 18q21-22, 22q11-13, Xp11
ve Xq24-28’i içeren kromozomlar arasında çeşitli pikler belirlenmiş (Abkevich ve ark. 2003, Holmans ve ark. 2004,
Kendler ve ark. 2001, Kia-Keating ve ark. 2007, Zubenko
ve ark. 2002) olmakla birlikte bu sonuçların çoğu tekrarlanamamıştır (Levinson 2006). Önceki bağlantı ve ilişkilendirme çalışmaları esas olarak heterojen toplumlarda yapılmıştı.
Karmaşık insan hastalıklarında sorumlu genlerin saptanması için genetik olarak homojen izolatlar çok iyi kaynaklardır
çünkü daha az genetik ve klinik heterojenite içerirler.
Bu makale, daha önce yayınladığımız ve psikiyatrik hastalık oranları yüksek olan geniş soyağaçlarının klinik epidemiyolojik kohortunda (Bulayeva ve ark. 2002, Bulayeva ve
ark. 2007) karmaşık hastalıkların gen haritalamasında izolatlar arası yaklaşımımızı, tüm genom çoklu bağlantı analizi (genome-wide multipoint linkage analysis) yöntemi kullanarak geliştirmektedir. Bu çalışmada iki ayrı dağlık alandan
köken alan, MDB ve intiharların bulunduğu çok kuşaklı iki
soyağacı ile çalıştık. Bu soyağaçlarının üyelerini, 1976 yılında VIGG RAS’da KB Bulayeva tarafından kurulan Dağıstan
Genetik Kalıtım Araştırma Programı yoluyla bulduk. Kısa
ardarda tekrar eden (short tandem repeat/STR) belirteçleri (marker) kullanarak yapılan tüm genom bağlantı analizine ek olarak, izolatlarımızdan seçilen etkilenmiş olgularda gen
kopya sayısı (copy number variation/CNV) için tek nükleotid polimorfizmini (single nucleotide polymorphism/SNP)
Affymetrix SNP 6.0 mikrodizilerle inceledik. CNV ve kopya sayısı polimorfizmi (copy number polymorphism/CNP)
karmaşık hastalıklardaki duyarlı genleri aramada önemli yeri
olan yeni araçlardır. CNV, büyüklüğü 1KB’den birkaç Mb’ye
kadar değişebilen DNA parça miktarı ile yaygın bir genomik
değişkenliktir. CNV’ler (duplikasyon veya delesyonlar) kodlama dizilimlerini keserek veya gen miktarını değiştirerek gen
ifadesini etkileyebilir, fenotipik çeşitliliklere ve patogeneze
162
katkıda bulunabilir. Amacımız başka psikiyatrik bozukluklarla ilişkilendirilmiş olan CNV’lerin (Glessner ve ark. 2009,
Stefansson ve ark. 2008, Walsh ve ark. 2008) MDB için varsayılan bağlantı bölgelerinde saptanıp saptanamayacağı ile ilgili veri toplamaktı. Bu çalışmada MDB ile bağlantılı genom
bölgelerinde bulunan delesyon ve duplikasyonlar bildirilmektedir.
Araçlar ve Yöntem
Nüfusun tanımlanması: Karadeniz ve Hazar Denizi’nin arasında yer alan Kafkas Bölgesi karmaşık tarihi olan, küçük bir
coğrafi alanda kültürel ve dil açısından oldukça ayrımlaşmış
bir bölgedir. Dağıstan-Nakt, Güney Kafkas, İndo-Avrupalı
ve Altay Dil Grubu olmak üzere 4 dil ailesine dahil olan 26
yerli Dağıstan etnik grubu vardır. 1976 yılında başladığımız
Dağıstan etnik gruplarının genetik epidemiyolojik çalışması
olan ön çalışmamız, bu etnik grupların birkaç yüz kuşak önce
var olan ortak bir atadan gelmiş olma olasılıklarını göstermiştir (Bulayeva ve ark. 2003). Daha sonra bu ortak ata toplum,
köy içi evlilikler yapan (endogamous) topluluklara ayrılmıştır.
Dağıstan yerli etnik gruplarını yıllık ziyaretlerimiz sırasında,
komşu izolatlarında belli bir hastalık yoğunluğu gözlenmeyen
birkaç ayrı izolatta şizofreni, zeka geriliği, depresyon, arteriyel
hipertansiyon, kanser gibi bazı karmaşık hastalıkların toplandığını saptadık. Bu çalışmada, yüksek depresyon oranı ve her
birinde resmi olarak belgelenmiş 11-12 intihar olgusu olan
iki ayrı dağlık, etnik Lezgi (Laks) köyü (#6007 ve #6008) üzerinde araştırmalarımızı yoğunlaştırdık.
Klinik Değerlendirme ve Tanı: Her iki izolatta etkilenmiş bireylerin çoğuna Dağıstan ruh sağlığı hastanelerinde daha önce
duygulanım veya şizoafektif bozukluk teşhisi konmuştu. Bu
bireylere biz de DSM-IV tanı ölçütlerini temel alan yapısal
bir psikiyatrik değerlendirme olan Genetik Çalışmalar için
Tanısal Değerlendirme’yi (Diagnostic Interview for Genetic
Studies/DIGS) (Nurnberger ve ark. 1994) uyguladık. DIGS’i
daha önceki çalışmamız için Rusçaya bilgisayar ortamında ve
basılı formda çevirmiş ve uyarlamıştık. Tanısal değerlendirmeler DIGS uygulaması konusunda eğitim almış ve klinik değerlendirmeler konusunda çok deneyimli olan iki Dağıstan’lı
psikiyatrist (R Kurbanov ve U Guseinova) tarafından yapılmıştır. Klinik görüşmemizde daha önce psikiyatri hastanelerinde tanı konmamış bireylerden DSM-IV tanı ölçütlerine göre MDB ölçütlerini karşılayanlar ‘olasılıkla’ etkilenmişler olarak sınıflandırıldı. Ayrıca hastalarda önemli olabilecek
ektanı durumlarını belirleyebilmek için tüm ektanıları başlangıç yaşı ve şiddetini de belirleyerek kaydettik. MDB için
DSM-IV eksen I tanı ölçütlerini karşılayan etkilenmiş bireyler bağlantı çalışmamıza dahil edilmişken, şizoafektif bozukluk belirtileri gösteren birkaç birey analizden çıkarıldı.
Klinik analizin bir bölümü olarak, desteklenmiş tanısal bilgi toplamak ve ulaşılamayan soyağacı üyelerinin MDB
belirtilerini elde etmek amacıyla, her aileden etkilenmemiş 3-4 üye ile de Genetik Çalışmalar için Aile Görüşmesi
(Family Interview for Genetic Studies/FIGS) uygulayarak görüştük. Evlilik yapısı, üreme özellikleri, yaşam süresi ile izolat üyeleri ve akrabaların hastalanma durumları hakkında demografik veri toplamak için ek incelemeler de yaptık.
Klinik görüşmelerden ve kan örneği alınmasından önce her
katılımcıdan yazılı aydınlatılmış onam alındı. Bu çalışma IRB
Rusya Bilim Akademisi Dağıstan Merkezi tarafından onaylandı.
Soyağacı Analizi: Her iki izolatta etkilenmiş ve olası etkilenmiş MDB bireyleri için aile tarihi hakkındaki bilgiyi kullanarak soyağaçlarını yeniden düzenledik. Yeniden düzenlenmiş
soyağaçları 12-13 kuşak boyunca #6007’de 241, #6008’de
364 bireyden oluşuyordu. Bu etnik gruplarda, babaların 7
kuşak önceye dayanan atalarıyla ilgili bilgiyi genç kuşağa aktarmaları bir gelenek olduğundan böylesine çok kuşaklı soyağaçlarını düzenlemek mümkün olabildi (Bulayeva ve ark.
2005). Her izolatta soyağacı bilgisi, değişik aile üyeleriyle yapılan görüşmelerle desteklendi ve doğrulandı. Soyağacının çizilmesi ve veri değerlendirmeleri için Progeny (Desktop version) yazılımı (Progency Software LLC) kullanıldı.
Genotipleme: Sağlıklı ve etkilenmiş soyağacı üyelerinin yaşamakta olan 3-4 kuşağından kan örnekleri toplandı. Periferik
kan lökositlerinden standart yöntemle genomik DNA elde
edildi. Her bireyin kan örneğinden yaklaşık 400 μgr DNA
standart yöntemlerle ayrıştırıldı. Bu DNA yüksek verimli genotipleme hizmeti veren Marshfield Tıp Araştırma Vakfı’nın
memeli genotipleme birimine gönderildi. Weber/CHLC haritası, genomu 10 cM çözünürlüğünde kaplayan yaklaşık 400
STR (çoğu tri ve tetranükleotid tekrarı) belirteci içermektedir.
Öncü bir analiz için, izolatlarımızdan ilişkisiz veya uzak ilişkili 11 etkilenmiş MDB olgusunda tüm genom SNP genotiplemesi (Affymetrix 6.0 mikrodizinler), Hiroşima
Üniversitesi’nde Prof. Takumi ve Kawakami laboratuvarlarında gerçekleştirildi. Tüm seçilmiş olgular etkilenmişti ve
tüm olguların etkilenmiş birinci ve ikinci derece yakınları vardı. 11 örnekten ikisi kalite kontrolü parametrelerini karşılayamadı ve analizimizden çıkarıldı. Kalan örneklerin ortalama
çağrı oranı (call rate) ≥ %99’du.
MDB için bağlantı sonuçlarını elde ettikten ve aday genleri analiz ettikten sonra bağlantı bölgelerindeki CNV’ler belirlendi.
İstatistiksel analiz: Bağlantı analizi için, MDB’si olan soyağacı üyelerini ‘etkilenmiş’, elde edilen tüm bilgilere göre psikiyatrik bozukluğu olmayan soyağacı üyelerini ‘etkilenmemiş’,
belirsiz klinik belirtileri olan soyağacı üyelerini de içeren diğer bireyleri ise ‘bilinmiyor’ olarak kabul ettik. Bağlantı çalışması için, altta yatan yapılanışları olasılıklarına orantılı
olarak dikkate alan ve bu şekilde geniş soyağaçlarını analiz
edebilen, Markov zinciri/Monte Carlo (Marcov chain/Monte
Carlo-MCMC) algoritmasına (Sobel ve Lange 1996) dayalı
“Simwalk 2” kullandık. Kalıtım modelinin %90 baskın veya
çekinik olduğunu, alel sıklığı 0.02 olan bir hastalığı ve genetik heterojenite varsayımını çoklu parametrik bağlantı analizi ile araştırdık. Dağıstan genetik izolatlarında bağlantı analizi için Simwalk 2’nin kullanımının detaylarını önceki yayınlarımızda açıklamıştık (Bulayeva ve ark. 2005, Bulayeva ve
ark. 2007).
CNV’ler, her SNP prob setinin bir referans sete karşılık sinyal yoğunluğunu kıyaslayarak kromozomal kazanım ve kayıpları tanımlamak için Golden Helix SVS ve saklı Markov
modeline (HMM) dayalı algoritmayı uygulayan Affymetrix
GTC 4.0 yazılımı ile hesaplandı. SVS ve GTC yönergelerinde anlatıldığı gibi tutarlı delesyon ya da duplikasyon gösteren en az 3 ardışık SNP olduğunda bir CNV belirlenmiş
olur. CN verisini düzeltme ve ayırmak için 5 durumlu (state)
saklı Markov modeli kullanıldı. Genomda CNV konumunu
belirlemek için kullanılan geniş veri grubunda ortaya çıkan,
uzamsal otokorelasyon veya “dalga” olarak adlandırılan teknik
artefaktın tüm genom boyunca varlığı, saptanan yalancı pozitif CN sayısını arttırabilir. Biyolojik olarak daha anlamlı veri
kümeleri elde etmek ve CNV’lerin sayılarında artma gözlemlemek için bu artefaktı ortadan kaldıracak bir yöntem kullandık (Marioni ve ark. 2007). Tüm genom SNP-genotipleme
dizisi ile her CNV’nin kesin sınırını belirlemek mümkün olmadığından, yaklaşık CNV sınırlarını saptamak için SNP konumlarını kullandık.
BULGULAR
Erken başlangıçlı MDB’nin yığılım gösterdiği, iki etnik Lezgi
genetik izolatından (#6007 ve #6008) toplam 64 kişi bu ön
çalışmaya alındı. İki izolatın demografik ve klinik özellikleri, uzun dönemli çalışmamızda saptanan şizofreni veya bipolar bozukluğun yığılım gösterdiği diğer genetik izolatlarla karşılaştırılarak Tablo 1’de verilmiştir. Yaşayan MDB, bipolar ve
şizofreni spektrum olgularının sayısı 19 ile 20 arasında değişiyordu. Dağıstan’ın aynı etnik köken ve nüfus yoğunluğuna sahip komşu dağlık köylerinin çoğunda resmen tanı konmuş MDB, bipolar ya da şizofreni olgusunun olmaması, başlatıcı (founder) etkisini düşündürmektedir. Bir izolattaki tüm
MDB olguları, sınırlı sayıda ortak ataları olan büyük ve geniş
bir soyağacında bulunmaktaydılar.
#6007 izolatı toplam üye sayı açısından (n=320), #6008 izolatına (n=900) göre daha küçüktü. Her izolattaki etkilenmiş
olgular için tekrar düzenlenen soyağaçları büyüklük olarak da
farklıydı: #6007 izolatında 11 kuşak boyunca 241 üye varken
( toplam 26 olgudan 15’inin DNA’sı elde edilebildi), #6008
izolatında 13 kuşak boyunca 327 üye vardı (toplam 38 olgudan 23’ünün DNA’sı elde edilebildi). Her iki soyağacında cinsiyet oranı benzer ve 1:1’e yakındı. Bununla birlikte bu
163
TABLO 1. Ruhsal Hastalıkların Bulunduğu Dağıstan Genetik İzolatlarının Tanımı.
İzolat ID
6007
6008
Etnik Grup
Lezgiler
Lezgiler
S
AFST*
Etkilenmiş yaşayanların
toplam sayısı
Gözlemlenen sayısı
(etkilenmiş)
Soyağacı Üye
Sayısı
İntihar Girişimi Sayısı
(kadın/erkek)**
320
900
MDB
MDB
19
30
26(15)
38 (25)
241
327
11(8/3)
12(8/4)
6010
Lezgiler
440
SCZ
17
24(10)
214
0
6034
Tindiler
1800
SCZ
42
86(39)
450
3 (2/1)
6022
Dargiler
1340
SCZ
35
42(20)
310
1 (0/1)
6017
Dargiler
700
SCZ
25
30(17)
257
3 (1/2)
6021
Kumuklar
2000
SCZ
31
41(25)
342
2(1/1)
6009
Avarlar
1300
BP
32
42(23)
324
1(0/1)
6015
Kubaçiler
3000
SCZ
11
18(6)
157
0
Başlangıç yaşı
S=İzolatlardaki toplam birey sayısı
*İzolatta prevalansı en yüksek ruhsal hastalık
** Tekrar düzenlenmiş soyağaçlarında son 3-4 kuşaktır intihar sayısı
SS
SH
ortalama
Akraba olmayan
evliliklerden olan çocuklar
Akraba evliliklerinden
olan çocuklar
ŞEKİL 1. MDB’nin akraba evliliği olan ve akraba evliliği olmayan çocuklarında başlangıç yaşı.
Ortalama= başlama yaşının ortalaması, SS= Standart sapma, H= Standart hata
izolatlarda intihar sayısının, kadınlarda erkeklere göre 2.5-2.6
kat daha fazla olduğunu bulduk. Olgunun aile üyeleriyle yapılan DIGS/FIGS görüşmelerinde ve bölge hastanelerinin kayıtlarından ailenin tıbbi öyküsü incelendiğinde belirlenen
intihar sayısı (11-12 intihar), şizofreni ve bipolar bozukluk
yığılmaları olan diğer herhangi bir genetik izolattan (0-3 intihar) çok daha fazladır (Tablo 1). Önemli olarak, izolatlarda
yaşlılar arasında intihar olgusu bildirilmemiştir. İntiharların
çoğu 16-22 yaşları arasındaki gençler tarafından gerçekleştirilmiş olup sadece 3 olgu 27-35 yaşları arasındaydı. Her iki
genetik izolat ve soyağacında, yüksek oranda (%85-90) geleneksel endogami (köy içi evlenmeler) ve akraba evlilikleri vardı. Soyağaçlarında hesaplanan soyluluk katsayılarının ortalama değerleri #6007 için 0.0375 ve #6008 için 0.0348 idi.
MDB’nin başlangıç yaşı, akraba evliliklerinden doğan çocuklarda (17.4±0.63) akraba olmayan evliliklerden doğan çocuklara (21.2±0.67) göre anlamlı olarak daha küçüktü (t=2.65,
df=78, p=0.009) (Şekil 1). Bu iki izolat aynı etnik kökene ait
( Lezgi) ve birbirine coğrafi olarak çok yakın (yaklaşık 15 km)
olmasına rağmen 11-13 kuşak boyunca köyler arasında sadece 2 evlilik belirledik.
164
Tablo 2’de
tüm genom çoklu bağlantı taraması görülmektedir. Hem dominant model (D/M) hem resesif model (R/M) altında, iki soyağacında da LOD puanı ≥ 1.2
olan (nominal p<0.5) tüm konumlar cM’de çok yakındaki belirteçler ve pik konumla gösterilmektedir. Belirlenmiş
bağlantı pikleri, izolata özgü genetik heterojenitenin yansımasıdır. Bununla birlikte LOD=1.2-3.4 olan 6 bağlama bölgesi (1p36.1-p35.2, 2p13.2-p11.2,13q31.1-q32.1,
17q25.3-18q22.1 ve 22q12.3), genetik modelde (baskın veya
çekinik), bu bölgelerde gözlenen bazı izolatlar arası farklılıklara rağmen iki soyağacında da homojenlik göstermiştir
(Tablo 2). Tablo 2’de görüldüğü gibi #6007’da 11, #6008’da
ise 13 ismen (nominal olarak) anlamlı bağlantı sinyali belirledik. Hem bağlantılı genomik bölge konumunda hem de geçiş tarzında en güçlü genetik homojenite, #6007 soyağacında anlamlı bağlantı (LOD=3.44) ve #6008’da güçlü izlenimde bağlantı (LOD=2.80) ile 22q12.3’de elde edildi (Tablo
2). Bu bölgedeki en güçlü sonuçların dominant geçiş modelinde alınmasına rağmen, 5-6 etkilenmiş olgunun bağlantı bölgesi boyunca geniş homozigot STR genotipi gösterdiği
unutulmamalıdır. 22q12.3’deki bölgeye ek olarak #6007’da
iki anlamlı (LOD>3) tüm genom bağlantı piki gözlenmiştir: biri 14q31.12-q32.13 (LOD=3.417, çekinik model) ve
diğeri 2p13.2-p11.2 (LOD=3.103, baskın model) (Tablo 2).
#6008’da 3≥LOD düzeyinde anlamlı tüm genom puanı gözlemedik. LOD≥2 düzeyinde anlamlı bağlantılar 9q33.3-q34.2
(#6008,R/M), 13q31.1-q31.2 (#6007, R/M), 11p15 (#6008,
R/M), 17q25.3 (#6007,R/M), 19q13.31-q13.33 (#6008,
D/M) ve 22q12.3’de (#6008, D/M) bulunmuştur.
Bağlantı analizi ile özgün bir kromozomal bölge belirlendikten
sonra, aday yatkınlık genlerinin saflaştırılması işleminin de yapılması gerekmektedir. Hastalığın patogenezinde rol oynayabilecek MDB bağlantı bölgelerindeki yapısal çeşitlikleri saptayabilmek için, CNV’nin ayrıntılı incelemesini Affymetrix
LOD 4
3
2
1
0
-1
-2
-3
-4
-5
-6
-7
-8
D2S1394
6007<2 D/M
6008<2R/M
D2S1777
cM
A
1,4
1,2
1
0,8
0,5
0,4
0,2
D18S1304
0
6007c 18 old
6007c 18 old
ATA8280
B
LOD
6007c22 D/M
6008<22 D/M
2,5
LOD
2
1,5
1
0,5
SYN3
LARGE
0
0
C
10
20
30
cM
D
ŞEKİL 2. İki Dağıstan genetik izolatından gelen soyağacında MDB için Kromozom 2(A), 18(B), 20(C) ve 22(D)’de bağlantı taraması ve bağlantı bölgelerinde saptanan CNV’ler. CNV’lerin saptandığı genler:
A. 2p13.2-p11.2 bölgesinde CTNNA2 ve LRRTM1 genleri.
B. 18q22.1 bölgesinde CDH7 ve CDH19 genleri (ve intergenik/genler arasında)
C. 20p13 bölgesinde SIRPB1 geni.
D. 22q12.3 bölgesinde SYN3 ve LARGE genleri.
6.0 microdizi verisine dayanarak yaptık. Toplamda 9 MDB
olgusunun tüm genom taramalarında, 5 veya daha fazla belirteç içeren, 100bp’den büyük 133 CN parçası (otozomlarda 116, X’de 15 ve Y’de 2) saptandı. Saptanan bu 133 parçadan 87’si kazanım (9 homozigot) ve 46’sı kayıp (5 homozigot) idi. CN parça boyutları 101 ile 4040kb arasında, ortalama boyut 308 kb, medyan boyut 178 kb ve SS’si 416.2 kb
olacak şekilde değişmekteydi. Bu çalışmada elde edilen sonuçlar, MDB ile bağlantılı 18 bölgeden 12’sinde CNV yapısal değişiklikleri olduğunu göstermiştir. Genomik dengesizliğin en yüksek oranı MDB ile bağlantılı 6 bölgede bulunmuştur: 2p13.2-p11.2 (6 kayıp, 6 kazanım), 4q25-q28.2 (4 kayıp,
2 kazanım), 7p14.1 (3 kayıp, 5 kazanım), 8p23.2-p23.1 (5
kayıp, 4 kazanım), 18q22.1 (6 kayıp, 2 kazanım) ve 20p13 (1
kayıp, 4 kazanım). Kromozom 2(A), 18(B), 20(C) ve 22(D)
için bağlantı tarama sonuçları ve bağlantı bölgelerinde bulunan CNV’ler Şekil 2’de gösterilmiştir.
Etkilenmiş bir olguda 8p23.2’de silinen büyük bir parça
(4040kb) gözlenmiştir (Şekil 3). 8p23 bağlantı bölgesi daha
önce ASD, şizofreni, BP ve zeka geriliği ile ilişkili olduğu bildirilen ARHGEF10, DLGAP2, CSMD1 ve MCPH1’i de kapsayan 17 gen içermektedir. CNV analizleri 8p23.1-p23.2’de
genomik dengesizliğin yerini göstermiş ve iki MDB aday geni
(CSMD1 ve MCPH1) daha saptamıştır. Gözlenen 9 MDB
165
TABLO 2. Erken Başlangıçlı Major Depresif Bozukluk Prevalansının Yüksek Olduğu İki Dağıstan Genetik İzolatında MDB İçin Tüm Gen Çoklu Bağlantı
Taraması.
#6007
#6008
HARİTA
LOD, R/M-D/M
Çok yakın konumlar, Pik/cM
HARİTA
LOD, R/M-D/M
Çok yakın konumlar, Pik/cM
1p36.1-p35.2
2p13.2-p11.2
4q25-q28.2
1.3, D/M
3.103,D/M
1.873,R/M
D1S552-D1S1622, 52.4
D2S1394-D2S1777,87
D4S2623-D4S2394,114
1p36.21
2p12-p11.2
1.43,R/M
1.4,R/M
D1S1356-D1S1352,62.2
D2S1777-D2S1790, 90
5q14.1-q14.3
7p12.3-p14.1
8p23.1-p23.3
9q33.3-q34.2
1.9,D/M
1.64,R/M
1.56,R/M
2.1,R/M
D5S1501-D5S1725,94.5
D7S2846-D7S1818,60.2
D8S264-D8S277,3
D9S1825-D92157,129.5
11p15.4-p15.5
12q24.1-q24.3
13q31.1-q32.1
2.1,R/M
1.56,D/M
1.3,D/M
D11S1984-D11S2362, 3
D12S2078-D12S1045,149.4
D13S317-D13S793,51
17q25.3
18q22.1
19q13.31-q13.33
1.3,D/M
1.32,D/M
2.7,D/M
D17S784-D17S928,123
D18S1364- ATA82BO2,90.7
D19S178-D19S246,66.9
22q12.3
2.80,D/M
D22S685-D22S683,28
9q21.33-q22.33
10p13-p12.33
1.2,D/M
1.7,R/M
D9S257-D9S910,84.8
D10S1430-D10S1423,33.5
13q31.1-q32.1
14q31.12-q32.13
17q25.3
18q22.1
2.31,R/M
3.417,R/M
2.48,R/M
1.3 D/M
D13S317-D13S793,53
D14S617-D14S1434,101
D17S784-D17S928,123
D18S1364- ATA82BO2, 97
20p13
22q12.3
1.95, D/M
3.44,D/M
D20S103-D20S482, 5
D22S685-D22S683,29.9
D/M, R/M – Hastalığa neden olan konumun kalıtımında baskın veya çekinik model.w
Ortak del
Del Ortak dupl
Dupl
ŞEKİL 3. 5 MDB olgusunda 8p23 ve 2p12 bağlantı bölgelerinde saptanan tekrarlayan CNV’ler
A. 6008 izolatından ortak ataları gözlenen (daire içine alınmış) 5 uzak akraba olgusu olan MDB soyağacı dalı.
MDB
İntihar
Olası
8p23.1duplikasyon
8p23.1delesyon
2p11.2-p12
duplikasyon
2p11.2-p12
delesyon
B. Soyağacı üyelerinde 8p23.1-p23.2’de saptanan segmental delesyon (3 olgu) ve duplikasyonlar (2 olgu). Ortak ataya kadar olan atalar arasında olası mutasyon taşıyıcıları noktalarla belirtilmiştir.
C. 5 etkilenmiş MDB olgusu arasında CNV büyüklükleri (kb) açısından bireysel farklılıklar olmakla birlikte olasılıkla ortak bir atadan alınmış olan genomik parça
(120 kb) tüm olgularda ortak.
166
ŞEKİL 4. MDB yığılımının olduğu iki genetik izolat soyağacında tüm genom bağlantı taramasının özetlenmiş sonuçları ve bağlantı bölgelerinde bulunan CNV’ler ile
olası aday genler.
Pembe yıldızlar LOD≥3 olan bölgeleri göstermektedir.
Kazanım
Kayıp
İzolat 6007’de bağlantı analizi sonuçları
İzolat 6008’de bağlantı analizi sonuçları
olgusundan 5’inde 8p23 bağlantı bölgesinde CN’lerin konumlarını ve büyüklüklerini analiz ettik ve aynı genomik
bölgede 3 olguda delesyon ve 2 olguda duplikasyon olduğunu bulduk (Şekil 3b). Bu olgular #6008 izolatından olup,
ortak ataları 4-7. kuşakta ve birbirleriyle uzak ilişkideydiler
(Şekil 3a). Soyağacının bu dalında tanı almış 15 MDB olgusu ve 5 intihar vardı. Analizimiz 5 MDB olgusunun tümünde
8p23’de 120 kb büyüklüğünde ortak bir CNV parçası olduğunu gösterdi. Ortak parça, ortak atadan aynı alelin iki ayrı
yoldan gelerek bir bireyde beraber olma hali (identity by descent/IBD) ile açıklanabilir (Şekil 3A-C). Duplikasyonu olan
diğer 2 MDB olgusu için ortak ata belirsizken, delesyonu olan
3 olguda mutasyon büyük olasılıkla 1. ve 2. ortak atalardan
kaynaklanmışa benziyordu (Şekil 3A). Bu 5 MDB olgusunda CNV’ler 2p12’de gözlenmiş ve CTNNA2 geni içinde yer
aldıkları belirlenmiştir. MDB ile bağlantılı bölgelerde saptanan CN’ler Şekil 4’de özetlenmiştir. Bu çalışmada değerlendirilen olgularda, MDB ile bağlantılı 6 genomik bölgede CN
bulunmamıştır: 1p35-p36, 5q14.1-q14.3, 9q21.33-q22.33,
11p15.4-p15.5, 12q24 ve 17q25.3 (Şekil 4).
TARTIŞMA
Dağıstan Genetik Kalıtım Programı tarafından yerli etnik
gruplar arasında yürütülen uzun dönemli araştırmada dağlık bölgelerde yüzlerce kuşak boyunca tecrit edilen üreme,
ayrılmış toplumlar arasında yüksek genetik farklılığa ve düşük heterojeniteye olanak sağlamıştır (Bulayeva ve ark. 2003).
Ayrıca dağlık bölgelerde yaşam süresi uzun olup, birkaç kuşak birlikte yaşadıkları ve geleneksel olarak doğum kontolü
yapmadıkları için, bu genetik izolatlarda aile grupları geniş
ve çok kuşaklıdır. Bu da yeterli miktarda etkilenmiş olgunun
belirlenebilmesi ve genetik izolatlardan kaliteli klinik ve soyağacı verisi toplanabilmesini sağlar.
Bu çalışmada tanımlanan genetik izolatlar, MDB olgularının
varlığı ile birlikte önemli sayıda intiharı da göstermektedir
(Tablo1). İntihar davranışının psikozdan ayrı bir alan olduğu
ve sosyokültürel rollerdeki cinsiyet farklılıkları ile ilişkili olduğunu ileri süren diğer verilerin (Oquendo ve ark. 2001) aksine bu çalışmanın sonuçları, tüm MDB olgularının intihar
etmiş bireylerin yakın genetik akrabası olmasına dayanarak
bu izolatlardaki intiharların çoğunlukla MDB ile bağlantılı
167
olduğunu öne sürmektedir. Dağıstan’ın uzak dağlık köylerinin tümünde benzer sosyokültürel gelenekler ve sosyoekonomik koşullar olmasının yanı sıra benzer yetersizlikte tıbbi servisler bulunmaktadır. Bu durum, çalışmamızdaki Dağıstan
soyağaçlarında yüksek MDB ve intihar varlığının sadece bu
iki kohorta özgü sosyal ve ekonomik durumlarla ilişkili olmadığını düşündürmektedir.
Her iki izolatta, intihar girişimi olan bireyler kadar çok etkilenmiş MDB olgularının da çoğu yakın akraba evliliklerinin
çocuklarıydı. MDB gibi orta düzeyde kalıtılan hastalıklarla
ilişkili olan genleri belirlemek için yüksek oranda akraba evlilikleri olan soyağacı alt kümeleri ile çalışmak yararlı olur, çünkü bu soyağaçların genetik ‘sinyal: parazit’ oranını arttıran genetik homojeniteleri yüksektir. Bu özellikle birçok küçük ve
zayıf genetik sinyali olan karmaşık hastalıklar için önemli bir
yöntemdir. Daha önceki bağlantı ve ilişkilendirme çalışmaları, MDB için -çoğu iki ya da daha az sayıda çalışmada tekrarlanabilmiş olan- bazı aday gen konumlarını göstermişlerdir
(Abkevich ve ark. 2003, Holmans ve ark. 2004, Kendler ve
ark. 2001, Kia-Keating ve ark. 2007, Levinson 2006). Çoğu
ilişkilendirme çalışması aday genleri belirlemek için serotonin
taşıyıcısı, seretonin reseptörleri, dopamin reseptörleri, tirozin hidroksilaz, MAO-A, COMT, triptofan hidroksilaz gibi
nörotransmiter sistemlerine odaklanmışlardır (Kato 2007,
Kia-Keating ve ark. 2007, Levinson 2006). TPH2 mutasyonunun (12q21) rolü, 5-HTTLPR (17q11.2) ve BDNF’nin
(11p14.1) promotor polimorfizmleri gibi dikkat çekse de bu
ilişkilerin önceleri düşünüldüğünden daha karmaşık olduğu
fark edilmiştir (Kato 2007, Levinson 2006). Meta analizler
serotonin taşıyıcı promotor bölgedeki (5-HTTLPR) polimorfizmler ile bipolar bozukluk, intihar davranışı ve depresyonla
bağlantılı kişilik özellikleri arasında küçük pozitif ilişkiler olduğunu ileri sürmekte ise de MDB ile ilişkisi bulunamamıştır (Levinson 2006).
Bizim iki genetik izolatta yaptığımız tüm genom bağlantı taramamız, önceki bulguları, MDB için 4q25,11p15, 12q2324, 13q31-32, 18q21-22 ve 22q13’de tekrarlamıştır (Tablo2);
1p36, 5q14, 7p, 9q,10p ve 17q25 bölgelerinde bulunan diğer bağlantı sinyallerinin MDB ile ilişkisi daha önce bildirilmemişse de bu bölgeler diğer psikiyatrik hastalıklarla (bipolar
bozukluk, anksiyete, şizoafektif bozukluk, alkol kötüye kullanımı, otizm vb.) ilişkili olduğu kanıtlanan genleri kapsamaktadır. #6007’de MDB ile anlamlı bağlantısı olan (LOD=3.13.4) 2 yeni genomik bölge bulduk; 2p13.2-p11.2’de (biraz
benzer bir sinyal #6008’dan olguların aynı bölgelerinde de görüldü) ve 14q31.12-q32.13’de (Tablo 2).
Biz 2p12 bölgesinde MDB ile bağlantı bulunduğunu belirlerken diğer araştırmacılar aynı bölgede tekrarlayan MDB’de
intihar yatkınlığı ile bağlantı olduğunu (LOD=1.2,P<0.0087)
saptamışlardır (D2S428 belirtecinde) (Butler ve ark.2010).
Ek olarak, 2p12’de LOD puanı= 4.2 ve LOD puanı=3.82
ile BP fenotipi ve intihar eğilimi bağlantısının kanıtı vardır
168
(Hesselbrock ve ark. 2004, Willour ve ark. 2007). Başka
bir çalışmada, MDB fenotipi ile intihar girişimleri arasında 2p12 bölgesinde bağlantı kanıtı bulunmamıştır (Cheng ve
ark.2006, Zubenko ve ark. 2004). Biz bu çalışmada, iki ayrı
genetik izolattaki MDB olgularında erken başlangıçlı tekrarlayan MDB ve intihar yatkınlığında 2p12-p11 bağlantısının
kanıtını bulduk. Bu bölgede konumlanan DCTN1, HTRA2,
CTNNA2 gibi ilgi odağı birkaç gen ve çok yakın bölgede
RNF103 geni vardır (Şekil 2A). Tüm bu genler en az bir çalışmada multipl skleroz, bipolar, ADHD veya Alzheimer hastalığı ile ilişkili bulunmuştur (Anney ve ark. 2008, Scott ve
ark. 2009). 2p12 bölgesindeki analizlerden elde edilen sonuçlar, CTNNA2 (alfa katenin) ve LRRTM1 (leucine-rich
repeat transmembrane neuronal protein 1) genlerinde MDB
olgularının ikisinde artış, 5’inde azalma ve MDB olgularında anlamlı olarak artmış bir parça ( rs7591785 ve rs7572995
SNP’leri arasında) göstermiştir (Şekil 2A). Katenin protein ailesi üyelerinin, serebral korteksin katlanması ve laminasyonunda önemli rol oynadığı bilinmektedir. CTNNA2 işlevleri
santral sinir sistemi boyunca sinaptik ilişkilerin düzenlenmesi ile ilgilidir (Hirano ve Takeichi 1994). Ayrıca LRRTM1 geninin solak olmakla ilişkili olduğu ve otizm, şizofreni ve diğer
psikiyatrik bozukluğu olan hastaların solak olmaya yatkınlığı
olduğu gösterilmiştir (Francks ve ark. 2007).
14q31-32’deki bağlantı bölgesi, şizofreni ile ilişkili ATXN3
genini, multipl skleroz ile ilişkili LGMN genini ve tiroid sistem patolojileri ile ilişkili GOLGAS5 genini içermektedir.
Bu genlerden herhangi biri bu çalışmada yüksek LOD sonucu
olan MDB bölgesinde de bulunabilir (Tablo 2). Kromozom
14q32.2‘de SERPINA1 (serpin peptidaz inhibitorü, clade A,
üye 1) geni içinde 9 MDB olgusundan 4’ünde kayıp ve 2’sinde kazanım gözlenirken, bu bölgedeki diğer yapısal farklılıklar genler arasındaydı (intergenik). SERPINA1 geni, belli enzimleri inhibe ederek birkaç kimyasal reaksiyonu kontrol
eden alfa-1 antitripsin enzimi için şablondur. Bu gende bulunan CNV’nin MDB’deki rolü henüz bilinmemektedir.
Bu bağlantı analizinde ortaya çıkan en yüksek LOD puanı,
LOD=3.44 ile #6007 soyağacının küçük genetik izolatında
22q12.3 genomik bölgesinde ve LOD=2.8 ile #6008 soyağacında bitişik genomik bölgede (pik 30cM’de) elde edilmiştir
(Şekil 2D). Bu bağlantı bölgesinde APOL3-6, TOM1, SYN3,
RBM9 ve RASD2 genlerini de içeren ve daha önce unipolar
veya bipolar duygulanım bozukluğu ve şizofreni ile ilişkili oldukları gösterilmiş 19 gen bulunmaktadır (Liu ve ark.2008,
Potash ve ark. 2008). Bizim sonuçlarımız da aynı genlerin
MDB ile ilişkili olabileceğini göstermiştir. Çalışmamızda, önceki çalışmalarda unipolar veya bipolar bozukluklar ve şizofreni ile ilişkisi saptanan SYN3 ve LARGE genlerinde (Liu ve
ark.2008, Potash ve ark. 2008) duplikasyonu olan 3, delesyonu olan 5 MDB olgusu vardı (Şekil 2D).
Olası MDB bağlantısı olan bölgelerde bazı diğer genler de
bulunmuştur. 1p35-p 36’daki bağlantı bölgesi serotonin
reseptör genleri HTR6 ve HTR1D ile nörogelişimsel ve nörodejeneratif hastalıklarla ilişkili diğer genleri kapsamaktadır.
4q25-q26’daki bağlantı bölgesi sendromik olmayan zeka geriliği tip 1 (MRT1) (MIM:249500) ile bağlantılı PRSS12’yi
kapsadığı gibi daha önce şizofreni ile ilişkili olduğu saptanan
EGF2 ve IL2 genlerini de kapsar (Bulayeva ve ark. 2009).
Ek olarak, Eski Düzen Amişlerde (Old Order Amish) bipolar
bozukluk ile 4q’daki bağlantının anlamlı olduğu daha önce
saptanmıştır (Pauls ve ark. 1995). Bununla birlikte 4q25-q26
bağlantı bölgesinde bulunan 2 kazanım ve 4 kayıp tamamiyle genler arasında (intergenik) olup genlerde binişme (overlapping) olmamıştır.
Toplam olarak 18 bağlantılı bölgenin 12’sinde, CNV parça
yeniden düzenlenmelerinin 29 kayıp ve 25 kazanım şeklinde
olduğunu belirledik. Bununla birlikte bağlantı bölgelerinde
konumlanmış bazı genlerde de daha küçük ebatta delesyon ve
duplikasyonlar bulduk. Bu tekrarlayan genomik özellikler ortak atalara ait meta-toplumdan ayrı izolatlara aktarılmış özgün MDB yatkınlık geni varyasyonları ile birleşmiş olabilir. MDB bağlantı bölgelerindeki bazı CNV’ler etkilenmiş
olgular arasında sık gözlenirken (Tablo 2, Şekil 3-4), bazıları Genomik Varyasyon Veritabanına göre sağlıklı kontrol kohortlarında görülen orta sıklıkta CNV’leri temsil etmektedir.
Öte yandan saptanan CNV’lerin bazıları yenidir. Örneğin,
etkilenmiş 5 MDB olgusunda daha önce otizm spektrum bozuklukları için aday gen olarak ileri sürülen (Glessner ve ark.
2009) POU6F2 geni içinde yeni CNV’ler (3 delesyon ve 2
duplikasyon) vardı ve bizim MDB çalışmamızda 7p14 bağlantı bölgesinde yerleşmişti. 7p14’de yerleşmiş ABCA13 geninde birçok nadir, az kodlanan değişken belirlenmiştir. Daha
önce yapılan bir çalışma 6 şizofreni, bipolar bozukluk ve depresyon olgusunda aynı konumda 1 anlamsız, 7 yanlış anlamlı mutasyon ve karışım heterozigot/homozigot tanımlamıştır (Knight ve ark. 2009). Bizim çalışmamız daha önceki bu
bulguları desteklemektedir ve verilerimiz 9 MDB olgusundan
5’inde ABCA13 geninde mikrodelesyonlar olduğunu göstermiştir.
zamanda yapılan bir çalışmada Alzheimer hastalarında ve
transgenik farelerde SIRP-beta1’in duyarlılığının arttığı (upregulated) ve amiloid prekürsör proteini J20’de (APP/J20)
mikroglia üstünde fagosit reseptörü olarak davrandığı bulunmuştur (Gaikwad ve ark. 2009).
Etkilenmiş olgulardan birinde 4 MB’dan fazla kapsayan
(spanning) en büyük delesyon 8p23.2 bölgesinde görülmüştür (Şekil 3A-C). Diğer 8 olgu şizofreni, bipolar bozukluk ve
mikrosefali ile ilişkili ARHGEF10, CSMD1 ve MCPH1 genlerini içeren çok yakın 8p23.1 bölgesinde 116-667 kb arasında değişen parça delesyon ve duplikasyonlar göstermiştir. Son zamanlarda mikrosefalin (MCPH1) otizm için akla
yakın aday gen olarak saptanmıştır. CSMD1 geni (CUB ve
Sushi çoklu etki) metamfetamin, alkol, nikotin ve diğer maddeleri kötüye kullanan bağımlı ve bağımlı olmayanlar arasında ayırıcı bir faktördür (Uhl ve ark. 2008). Yakın zamanlı çalışmalar 8p23.1- 8p23.2 duplikasyonunun, konuşması geciken ve ICD-10 tanı ölçütlerine göre otizm tanısı alan bir çocuk ile epilepsi ve öğrenme sorunları olan annesinde gösterilmiştir (Glancy ve ark. 2009). Duplike olan bölgenin distal
kesme noktasının 8p23.2’deki CSMD1 genini duraklattığı ve
mediyal kesme noktasının MSRA ve RP1L1 genleri arasında
olduğu da saptanmıştır.
Bağlantı bölgelerindeki CNV analizleri ile birlikte tüm genom STR’lerin bağlantı taramalarının daha derin mikrodizilerle yapılmasının, karmaşık hastalıkların patogenezinde seyrek, sık ve yeni CNV’lerin oynadığı rolleri belirlemek için etkili bir yol olacağına inanıyoruz. Hastalıkların yatkınlık genlerinin belirlenme olasılığı, belli bir karmaşık hastalığın toplandığı, genetik olarak homojen izolatların olduğu soyağaçları yoluyla artar. Burada anlatılan SNP sıralanışına dayanan
CNV sonuçları, fikir verici bir ön çalışma olarak kabul edilmelidir. İleri çalışmalarla soyağacının etkilenmemiş bireylerini de kapsayan tüm kohortun araştırılmasına ihtiyaç vardır.
Etkilenmiş MDB olgularının 3’ünde MDB ile bağlantılı
20p13 bölgesinde SIRPB1 geni içinde homozigot CNV’ler
ve 2’sinde heterozigot CNV’ler belirledik (Şekil 2C). Bu sonucun MDB patogenezinde önemi olabilir, çünkü yakın
Teşekkür: Dağıstan genetik izolatı soyağacı örneklerinde gerçekleştirdikleri yüksek
kalitede STR genotipleme çalışmaları için Dr. J. Weber’e ve NHLBI Memeli
Genotipleme Servisi’ne (NIH/NHLBI Bursu 1998, Dr. H. Coon ve Dr. K. Bulayeva)
ve seçilmiş MDB olgularında AFFX SNP 6 genotipleme çalışmaları için Prof.
Takumi ve Prof. Kawakami’ye (Hiroşima Üniversitesi, Japonya) teşekkür ederiz.
KAYNAKLAR
Bulayeva K, Jorde L, Ostler C ve ark. (2003) Genetics and population history of
Caucasus populations. Hum Biol, 75:837-53.
Abkevich V, Camp N, Hensel C ve ark. (2003) Predisposition locus for major
depression at Chromosome 12q22-12q23.2. Am J Hum Genet, 73:1271–
81.
Bulayeva K, Pavlova T, Kurbanov R ve ark. (2002) [Mapping genes of complex
diseases in genetic isolates of Dagestan]Kartirovanie genov kompleksnykh
zabolevanii v geneticheskikh izoliatakh Dagestana. Genetika, 38:1539-48.
Anney RJ, Lasky-Su J, O’Dushlaine C ve ark. (2008) Conduct disorder and
ADHD: Evaluation of conduct problems as a categorical and quantitative
trait in the international multicentre ADHD genetics study. Am J Med
Genet B Neuropsychiatr Genet, 147B:1369-78.
Bulayeva KB, Glatt SJ, Bulayev OA ve ark. (2007) Genome-wide linkage scan of
schizophrenia: a cross-isolate study. Genomics, 89:167-77.
Bulayev O, Spitzin V, Bulayeva K (2009) Population approach to mapping genes
of complex diseases. J MedGenetics, 4:3 -17.
Bulayeva KB, Leal SM, Pavlova TA ve ark. (2005) Mapping genes of complex
psychiatric diseases in Daghestan genetic isolates. Am J Med Genet,
132B:76 - 84.
169
Butler AW, Breen G, Tozzi F ve ark. (2010): A genomewide linkage study on
suicidality in major depressive disorder confirms evidence for linkage to
2p12. Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet, 153B:1465-73.
Cheng R, Juo SH, Loth JE ve ark. (2006): Genome-wide linkage scan in a
large bipolar disorder sample from the National Institute of Mental Health
genetics initiative suggests putative loci for bipolar disorder, psychosis,
suicide, and panic disorder. Mol Psychiatry, 11:252-60.
Francks C, Maegawa S, Lauren J ve ark. (2007) LRRTM1 on chromosome 2p12
is a maternally suppressed gene that is associated paternally with handedness
and schizophrenia. Mol Psychiatry, 12:1129-1139, 1057.
Gaikwad S, Larionov S, Wang Y ve ark. (2009) Signal regulatory protein-beta1:
a microglial modulator of phagocytosis in Alzheimer’s disease. Am J Pathol,
175:2528-39.
Glancy M, Barnicoat A, Vijeratnam R ve ark. (2009) Transmitted duplication of
8p23.1-8p23.2 associated with speech delay, autism and learning difficulties.
Eur J Hum Genet, 17:37-43.
Glessner J, Wang K, Cai G ve ark. (2009) Autism genome-wide copy number
variation reveals ubiquitin and neuronal genes. Nature, 459:569-73.
Glowinski A, Madden P, Bucholz K ve ark. (2003) Genetic epidemiology of selfreported lifetime DSM-IV major depressive disorder in a population-based
twin sample of female adolescents. J Child Psychol Psychiatry, 44:988-96.
Hesselbrock V, Dick D, Hesselbrock M ve ark. (2004) The search for genetic risk
factors associated with suicidal behavior. Alcohol Clin Exp Res, 28:70S-76S.
Hirano S, Takeichi M (1994) Differential expression of alpha N-catenin and
N-cadherin during early development of chicken embryos. Int J Dev Biol,
38:379-84.
Holmans P, Zubenko G, Crowe R ve ark. (2004) Genomewide significant
linkage to recurrent, early-onset major depressive disorder on chromosome
15q. Am J Hum Genet, 74:1154-67.
Levinson D (2006) The genetics of depression. Biol Psychiat, 60:84-92.
Liu Y, Fann C, Liu C ve ark. (2008) RASD2, MYH9, and CACNG2 genes
at chromosome 22q12 associated with the subgroup of schizophrenia with
non-deficit in sustained attention and executive function. Biol Psychiat,
64:789-96.
Marioni JC, Thorne NP, Valsesia A ve ark. (2007) Breaking the waves: Improved
detection of copy number variation from microarray-based comparative
genomic hybridization. Genome Biol, 8:R228.
Nurnberger J, Blehar M, Kaufman C ve ark. (1994) Diagnostic interview
for genetic studies: Rationale, unique features and training. Arch Gen
Psychiatry, 51:849-62.
Oquendo MA, Ellis SE, Greenwald BS ve ark. (2001) Ethnic and Sex Differences
in Suicide Rates Relative to Major Depression in the United States. Am J
Psychiatry, 158:1652–8.
Pauls DL, Ott J, Paul SM ve ark. (1995) Linkage analyses of chromosome 18
markers do not identify a major susceptibility locus for bipolar affective
disorder in the Old Order Amish. Am J Hum Genet, 57:636-43.
Potash J, Buervenich S, Cox N ve ark. (2008) Gene-based SNP mapping of a
psychotic bipolar affective disorder linkage region on 22q12.3: Association
with HMG2L1 and TOM1. Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet,
147B:59-67.
Scott LJ, Muglia P, Kong XQ ve ark. (2009) Genome-wide association and metaanalysis of bipolar disorder in individuals of European ancestry. P Natl Acad
Scı,106:7501-6.
Sobel E, Lange K (1996) Descent graphs in pedigree analysis: Applications to
haplotyping, location scores, and marker sharing statistics. Am J Hum
Genet, 58:1323-37.
Stefansson H, Rujescu D, Cichon S ve ark. (2008) Large recurrent microdeletions
associated with schizophrenia. Nature, 455:232-6.
Kato T (2007) Molecular genetics of bipolar disorder and depression. Psychiat
Clin Neuros, 61:1-17.
Sullivan P, Neale M, Kendler K (2000) Genetic epidemiology of major
depression: Review and meta-analysis. Am J Psychiatry, 157:1552-62.
Kendler KS, Thornton LM, Gardner CO (2001) Genetic risk, number of
previous depressive episodes, and stressful life events in predicting onset of
major depression. Am J Psychiat, 158:582-6.
Uhl GR, Drgon T, Liu QR ve ark. (2008) Genome-wide association for
methamphetamine dependence: Convergent results from 2 samples. Arch
Gen Psychiat, 65:345-55.
Kia-Keating B, Glatt S, Tsuang M (2007) Meta-analyses suggest association
between COMT, but not HTR1B, alleles, and suicidal behavior. Am J Med
Genet, B144:1048–53.
Kim S, Choi K, Baykiz A ve ark. (2007) Suicide candidate genes associated with
bipolar disorder and schizophrenia: an exploratory gene expression profiling
analysis of post-mortem prefrontal cortex. BMC Genomics, 12:413.
Knight HM, Pickard BS, Maclean A ve ark. (2009) A cytogenetic abnormality and
rare coding variants identify ABCA13 as a candidate gene in schizophrenia,
bipolar disorder, and depression. Am J Hum Genet, 85:833-46.
170
Walsh T, McClellan J, McCarthy S ve ark. (2008) Rare structural variants disrupt
multiple genes in neurodevelopmental pathways in schizophrenia. Science,
320:539-43.
Willour VL, Zandi PP, Badner JA ve ark. (2007) Attempted suicide in bipolar
disorder pedigrees: Evidence for linkage to 2p12. Biol Psychiat, 61:725-7.
Zubenko G, Hughes H, Stiffler J ve ark. (2002) Genome survey for susceptibility
loci for recurrent, early-onset major depression: Results at 10 cM resolution.
Am J Med Genet, 114:413–22.
Zubenko GS, Maher BS, Hughes HB ve ark. (2004) Genome-wide linkage
survey for genetic loci that affect the risk of suicide attempts in families with
recurrent, early-onset, major depression. Am J Med Genet, 129B:47-54.